共价连接β2m的HLA-A2/IgG1二聚体的构建、表达与纯化

摘要

目的 HLA-A2/IgG1二聚体经蛋白A(SPA)亲合层析柱浓缩纯化时容易发生β2m解离,为了解决这个问题,研究构建与表达β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白.方法 利用基因重组技术构建β2m-HLA-A2/IgG1融合基因真核表达载体pcDNA3-1(+)-[β2m-HLA-A2/IgG1],将其转染721.221细胞系,筛选高表达β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白的细胞株;收集细胞培养上清,SPA亲合层析柱浓缩纯化,检测该蛋白的纯化效率.结果 β2m-HLA-A2/IgG1融合基因转染721.22I细胞后可表达正确构象的β2m-HLA-A2/IgG1二聚体,Western blot显示β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白的分子量与预期大小一致;经SPA亲合层析柱纯化后,β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白较HLA-A2/IgG1融合蛋白的纯化效率约高5倍.结论 共价连接β2m的HLA-A2二聚体有助于HLA-A2二聚体在低pH值的环境下保持构象完整.