FRAP法对内源性GFP在活细胞中动态分布的共焦显微镜成像

摘要

各种分子在核质间的动态分布与它们的跨膜转运密切相关.离子、mRNA和多数小分子量蛋白可以通过核孔复合物(NPCs,nuclear pore complexes)在核质间自由扩散,而分子量大于70kDa的分子需要ATP和核定位序列才能实现跨膜转运.本实验利用荧光漂白后恢复(FRAP,fluorescence recovery after photobleaching)法观测人肺腺癌肿瘤细胞(ASTC-a-1)中表达的27kDa EGFP在核质间的被动扩散,并以激光共焦显微镜进行实时成像.转染EGFP外源基因的肿瘤细胞系在经过半年的传代培养后仍能稳定而高效的表达其荧光标记.实验表明,EGFP分子可以通过核孔在核质间被动扩散,但扩散速度远低于在核内或质内的速度,没有证据表明EGFP可以在细胞间扩散.