H5亚型禽流感病毒单抗-生物素捕获ELISA的建立

摘要

目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素-亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础.方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生物素标记的单抗和酶标亲和素来检测病毒血凝素抗原,经方阵试验优化ELISA反应体系.用该方法检测H1-H15亚型AIV标准毒株和H5、H7、H9亚型AIV分离株,并与血凝和血凝抑制试验比较,评价其敏感性和特异性.结果纯化后的单抗具有良好的反应活性,生物素标记单抗工作浓度为1:5000;ELISA对H5亚型AIV的检出限为0.25个血凝单位.该ELISA反应体系能检出H5N3标准株和所有20株国内H5亚型AIV分离株,而与其他14个血凝素亚型的AIV标准株、15个H9亚型AIV分离株和2个H7亚型AIV分离株均无交叉反应.结论初步建立了检测H5亚型禽流感病毒的单抗-生物素捕获ELISA方法,为研制试剂盒和进一步应用试验提供了基础.