中国白兔白介素-10基因的克隆、表达及其抗体的制备

摘要

目的 克隆并表达中国白兔IL-10基因,制备抗IL-10多克隆抗体.方法 运用RT-PCR对从ConA诱导后的中国白兔外周血单核细胞(PMBCr)总RNA中扩增IL-10基因,克隆后进行测序和遗传进化分析,同时将其亚克隆pET28a中,在大肠杆菌中诱导表达,并用纯化的表达产物制备多克隆抗体.结果 该基因全长537 bp,编码178个氨基酸.与欧洲兔IL-10基因同源性很高,但与鼠、鸡、河豚和斑马鱼等不同物种IL-10基因差异较大.经IPTG诱导后,重组菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为23.4 ×103的重组蛋白.Western blot分析表明,中国白兔IL-10基因已经表达.重组表达的蛋白量可占菌体蛋白的15.2%.结论 成功实现了中国白兔IL-10的原核表达,制备了小鼠抗兔IL-10的多克隆抗体.