斑马鱼ints12的CRISPR/Cas9敲除及其对UsnRNA剪接的调控

摘要

整合因子(Integrator)复合体通过调控UsnRNAs(U-rich small nuclear RNAs)的转录成熟过程,影响premRNA的内含子剪切,对生物体内形成成熟mRNA有重要作用.但是在脊椎动物中,整合因子复合体的表达调控及其发育功能研究尚十分缺乏.研究利用斑马鱼(Danio rerio)模型,通过CRISPR/Cas9技术构建了ints12(Integrator subunit 12)的基因敲除品系,得到了2种缺失不同碱基的突变品系.在ints12的合子突变体(Zints12)中,通过荧光定量PCR分析,发现UsnRNA的3'box剪切存在缺陷.与同龄的野生型斑马鱼相比,Zints12体型偏小且表现为全雄.进一步研究发现,在Zints 12成体中,细胞增殖相关因子出现显著下调表达,ints12自身pre-mRNA的加工也出现内含子滞留,表明ints12对自身mRNA的剪切存在一个“自循环”式的调控模式.研究获得了斑马鱼的ints12基因敲除纯合突变体并发现ints12通过调控UsnRNA的剪切参与斑马鱼的个体生长和发育.