养殖中华鳖蜡样芽孢杆菌的分离、鉴定和致病性研究

摘要

2016年夏杭州某中华鳖(Pelodiscus sinensis)养殖场出现大量发病,病鳖呈厌食、反应迟钝、四肢无力、池边独游、濒死前不停摇头等病症,死亡率20％以上.用营养琼脂从典型症状濒死中华鳖分离到革兰阳性短杆状,芽孢近中生或中生的分菌株;API 50 CHB对分离菌株T91-1鉴定结果显示与蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)参考菌株ATCC 1457997.4％相似;T91-116S rDNA和gyrB基因序列与ATCC 14579相似度为99％,确认T91-1为蜡样芽孢杆菌.T91-1在羊血平板呈典型β溶血,牛奶平板上出现明显透明圈,表明存在溶血性和胞外蛋白酶类毒素.用T91-1肌肉注射感染健康中华鳖LD50为4.91×105CFU/ind.,死亡鳖出现与自然发病鳖类似症状;感染发病中华鳖血和肝印/涂片瑞氏-姬姆萨染色可见组织间隙有大量芽孢杆菌.自然发病鳖肾、肝、肺、心病理切片可见大量芽孢杆菌,病鳖血管扩张充血,嗜酸性粒细胞浸润.T91-1灌胃ICR乳鼠3d后可全部死亡,死亡鼠呈皮下出血等症状;T91-1腹腔注射和灌胃ICR 4周龄小鼠12—24h可出现迟钝、厌食等症状,1周内未出现死亡.上述结果表明蜡样芽孢杆菌对中华鳖有很强毒力,对小鼠有较强肠毒性,是引起本次杭州中华鳖暴发性疾病的病原.