鲫鱼低氧相关基因差减cDNA文库的构建与分析

摘要

鲫鱼对低氧具有极强的耐受性.在低氧状态下鲫鱼鳃瓣表面积增加,无氧代谢增强,能量消耗降低.但是人们对鲫鱼产生这些低氧反应的分子机理还缺乏了解.本研究以1%低氧处理24h的鲫鱼囊胚细胞(CAB)作为检测子(Tester),常氧条件下培养的CAB细胞作为驱赶子(Driver),分别提取总RNA,利用SMART cDNA技术合成双链cDNA.经差减杂交和抑制性PCR扩增获得差减PCR产物.然后将差减PCR产物连接到pGEM-T载体上,构建差减cDNA文库.以管家基因β-actin作为指标检测差减效率,发现该文库差减效率达28倍.随机挑选阳性克隆进行PCR检测,显示差减片段在0.1-2kb之间.挑取含有插入片段的1300个克隆进行测序,通过生物信息学分析获得267个基因序列(e≤0.001;Identity>40%).该差减cDNA文库的成功构建对克隆鱼类耐低氧相关基因和深入认识鱼类耐受低氧的分子机制有非常重要的意义.