草鱼钠磷协同转运载体Slc34a2基因的克隆及组织表达分析

摘要

为了揭示草鱼对磷的吸收机制,运用RT-PCR和快速扩增cDNA末端方法,从草鱼(Ctenopharyngodon idella)肠中克隆获得钠磷协同转运载体基因Slc34a2,该基因全长为2446 bp,包含了1938 bp的开放阅读框,47 bp的5'非编码区(Untranslated region,UTR)和461 bp的3'UTR,编码645个氨基酸.草鱼SLC34A2蛋白的分子式为C3215H5125N801O902S30,分子量大小为70.39 kD,等电点为5.68,总平均疏水指数为0.458.对草鱼SLC34A2蛋白结构和功能预测分析,发现SLC34A2蛋白有11个跨膜域,1个半胱氨酸富集区,且N-端在胞外而C-端在胞内,也在第二个细胞外环中发现4个N-糖基化位点.用邻接法构建系统进化树,发现草鱼Slc34a2基因与硬骨鱼类聚类为一支,且草鱼SLC34A2蛋白与鲤(Cyprinus carpio)和斑马鱼(Danio rerio) SLC34A2的相似性最高,分别为90.3％和87.0％.实验采用了实时荧光定量PCR对草鱼Slc34a2 mRNA进行组织表达分析,结果表明lc34a2 mRNA在组织中广谱表达,且在肠中表达最高,其次是肝脏、鳃、肾脏、脾脏、皮肤、肌肉、脑和头肾.实验为以后研究提高鱼对磷的利用和减少磷的排放奠定分子基础.