脆壁克鲁维酵母蛋白二硫化物异构酶基因的克隆

摘要

根据脆壁克鲁维酵母（K.fragilis）与酿酒酵母（S.cerevisiae）蛋白二硫化物异构酶（PDI）基因的同源性设计成PDI引物,引物末端标记成PDI探针。用PDI探针与K.fragilis CBS397基因文库进行原位杂交,得到并初步证实一阳性克隆。通过Southern印迹杂交实验,初步分析了该阳性克隆的物理图谱并将该PDI基因定位于K.fragilis基因组的第5条染色体上。该PDI基因的部分序列也已经被测定。采用比浊法,测定胰岛素蛋白二硫键的还原反应,结果表明克隆的PDI基因具有蛋白二硫化物异构酶的酶活力。