融合有HBV前S1（21～47）片段的HCV E2糖蛋白在CHO细胞中的表达和鉴定（英文）

摘要

在构建丙型肝炎病毒 （HCV）被膜蛋白E2的CHO细胞稳定表达株时 ,为了方便进行表达产物的检测和纯化 ,将编码E2N端 2 77个氨基酸 （384～ 6 6 1）的基因片段和编码乙型肝炎病毒前S1（2 1～ 4 7）区的基因融合 ,一起插入分泌表达载体pSecTagB ,所得重组质粒转染的CHO细胞经Zeocin选择 ,得到稳定细胞株CHO/sS1E2。以E2和 preS1特异的抗体进行免疫印迹分析 ,从筛选到的稳定细胞株检测到了分泌的以及细胞内的表达产物。用糖链类型特异的糖苷酶对表达产物进行了酶解分析 ,发现绝大多数胞内的E2糖蛋白产物是高甘露糖型的 ,而分泌的E2糖蛋白产物则绝大多数是复杂糖化的 ,表明表达的E2在分泌过程中经历了高尔基体的进一步修饰。初步的分析显示 ,融合抗原能特异地和前S1抗体偶联的Sepharose结合 ,并能被顺利地洗脱 ,表明该免疫亲和介质能用于融合抗原的大规模制备。为进一步研究HCVE2糖蛋白的免疫学性质以及重组的HBV/HCV双价疫苗创造了条件。