甜蛋白大肠杆菌工程菌株发酵条件的优化及重组蛋白纯化方法的研究

摘要

将带有monellin基因的重组分泌型表达载体pETMO转入大肠杆菌BL21(DE3),得到重组工程菌株BLC01.研究不同的表达条件对甜蛋白表达水平的影响,得到优化发酵条件:装液量为50ml/250ml三角瓶,当培养液0D值达0.8时,添加诱导剂IPTG至浓度为0.9mM,32℃诱导5h.此时,甜蛋白monellin表达量可高达细菌可溶性蛋白的45.2%.超声破碎细胞后,利用热处理和酸处理结合的方法有效去除宿主蛋白,透析后利用Sephadex G-50进行柱层析,得到纯化重组甜蛋白monellin.monellin基因在重组大肠杆菌中的表达产物具有生物活性.