肥城桃果实2-Cys Prx基因克隆、生物信息学分析及原核表达

摘要

为了深入研究2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号分子作用机制,结合了PCR技术和RT-PCR技术通过体外克隆的方法得到桃果实2-Cys Prx基因,通过对序列分析表明,2-Cys Prx基因全长1424 bp,其中,编码区813 bp,共编码270个氨基酸.对其分子结构进行分析,2-Cys Prx蛋白分子量为29.7 ku,为疏水型蛋白,且是膜外蛋白.在线软件预测2-Cys Prx蛋白分子式为C1342 H2110 N348 O403 S4,分子量29.696 ku,由4207个原子组成,理论等电点为6.23.使用ProtScale分析该蛋白疏水性平均值为-0.126,说明2-Cys Prx为亲水性蛋白.TMHMM对跨膜结构进行预测,发现,2-Cys Prx氨基酸序列中不存在跨膜结构域,为膜外蛋白.此外,对该蛋白二级结构进行预测,发现2-Cys Prx有4个α螺旋结构、9个β折叠结构及无规则卷曲构成.系统进化树分析表明,肥城桃果实2-Cys Prx与其他植物氨基酸序列有较高同源性,其中与樱桃的亲缘关系最近,相似度达到了98.15％,表明植物体内2-Cys Prx具有较高的保守性.体外构建重组蛋白pET-30a-2-Cys Prx成功在大肠杆菌BL21中表达,为下一步研究其功能与结构,从而探讨2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号作用机理奠定了基础.