东方粘虫中肠V-ATPase H亚基原核表达及纯化

摘要

对东方粘虫Mythimna separate (Walker)中肠V ATPase H亚基基因(VATPH)进行克隆、原核表达及纯化.首先采用RT-PCR技术克隆基因,再构建原核表达载体(pET15b VATPH)并转入E.coil BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D thiogalactoside,IPTG)诱导表达,用Ni-NTA柱及S-200分子筛纯化,最后进行SDS PAGE分析.结果表明,pET15b-VATPH可高效表达V-ATPase H亚基,纯化后可获得单一条带且分子质量约为55 ku的重组蛋白.该结果为进一步研究V-ATPase H亚基的晶体结构,药物小分子与H亚基大分子的相互作用,尤其是以H亚基为筛选模型创制新农药奠定基础.