A型口蹄疫病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立

摘要

以原核表达经纯化复性制备的A型口蹄疫病毒(FMDV) VP1蛋白代替传统病毒抗原包被,建立快速、安全、有效的A型FMDV抗体ELISA检测方法.对前期制备的A型VP1蛋白进行Western-Blot检测,结果表明,VP1蛋白能够特异性识别A型FMDV阳性牛血清,可作为检测抗原建立检测A型FMDV抗体的方法.以最佳质量浓度1 mg/L VP1蛋白为检测抗原,方阵滴定法确定最佳检测血清稀释度为1∶50[V(血清);V(封闭液)],最佳的酶标二抗稀释度为1∶2 000[V(酶标二抗)∶V(封闭液)],建立A型FMDV抗体ELISA检测方法.该方法的敏感性为94.32％,特异性为99.09％,批内与批间重复试验变异系数均小于8％.采用该方法检测201份临床血清,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达92.54％.研制的VP1-ELISA试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控A型口蹄疫抗体水平.