反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y生长和凋亡的作用

摘要

目的研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤(NB)细胞株SH-SY5Y的生长和凋亡的作用.方法采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2;应用脂质体Lipofectamine转染SH-SY5Y,经嘌呤霉素筛选,应用RT-PCR证实外源性反义bcl-2 mRNA的表达,建立细胞株SH-SY5Y/Asbcl-2;应用免疫组化和Western印迹分析Bcl-2蛋白的表达变化;MTT法做细胞的生长曲线观察细胞的生长情况;通过提取基因组DNA检测顺式氯铂(CP)诱导的细胞凋亡所形成的DNA梯带.结果 RT-PCR证实转染细胞SH-SY5Y/Asbcl-2中有外源性反义bcl-2 mRNA的表达;免疫组化及Western印迹分析显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞的Bcl-2蛋白表达明显降低;生长曲线显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞生长缓慢;加入CP相同时间后,SH-SY5Y/Asbcl-2细胞凋亡形成的DNA梯带更明显.结论脂质体方法转染携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体能够获得稳定转染和表达反义bcl-2 mRNA的细胞;反义bcl-2 mRNA可抑制内源性Bcl-2蛋白的表达,抑制SH-SY5Y细胞的生长,增加SH-SY5Y细胞对CP的敏感性,促进细胞凋亡.