BAC介导的含97kb人β类珠蛋白基因簇转基因鼠模型的建立

摘要

目的利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,修饰含全长人β珠蛋白基因簇及一段IL-11受体α链基因的BAC(细菌人工染色体)克隆,建立只包括全长人β珠蛋白基因簇的转基因鼠模型.方法分别在待删除片段上、下游用PCR合成500bp左右的两段同源序列,共同克隆入构建载体pBV的HindⅢ和Xba Ⅰ位点之间,然后以 Sal Ⅰ酶切后将此1 kb的插入片段再克隆入温度敏感型穿梭载体pSV-RecA中,转化含B5-BAC DNA的感受态大肠杆菌DH10B,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸(FA)负筛选,获得发生两次同源重组后只含修饰后的BACDNA 而穿梭载体已丢失的菌株.经脉冲场凝胶电泳鉴定后,纯化修饰的BAC DNA,经显微注射受精卵制备转基因鼠,分析其中的人β珠蛋白基因簇整合和表达状况.结果利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,获得了IL-11受体α链基因被定位删除的含完整人β珠蛋白基因簇的BAC克隆(命名为βD-BAC),建立了 3株独立的转基因鼠株系.结论新的BAC介导的转基因鼠中的人β珠蛋白基因簇显示正确的表达模式和水平.