RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α对人乳腺癌细胞功能的影响

摘要

目的 研究靶向针对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的短发夹RNA(shRNA)对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞功能的影响.方法 氯化钴模拟低氧环境.采用RNA干扰技术,构建针对HIF-1α的shRNA真核表达载体,转染MCF-7细胞.RT-PCR检测RNA干扰后MCF-7中血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化.实时定量PCR和Western blot技术分别检测HIF-1α mRNA和蛋白质水平.Sub-G1测定、AnnexinV荧光标记和DNA ladder检测细胞凋亡.流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 缺氧后,MCF-7中的HIF-1α表达增加(P＜0.01),而凋亡率较常氧降低(P＜0.05).shRNA转染MCF-7后,HIF-1α的表达下调91.63%(P＜0.01).阿糖胞苷诱导或无凋亡诱导剂时,干扰组凋亡率比未转染组分别增高1.75倍(P＜0.01)和61.31倍(P＜0.01).与未转染组相比,干扰组中的VEGF下调66.8%(P＜0.05).干扰组细胞周期进程也较未转染组减缓.结论 HIF-1α在MCF-7中发挥抗细胞凋亡的作用.本室构建的针对HIF-1α的shRNA能够促进MCF-7凋亡,下调VEGF表达,推迟细胞周期.