主动免疫肌动蛋白样蛋白7a蛋白引起小鼠睾丸曲细精管的损伤

摘要

目的 原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况.方法 构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化E.coli Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的 蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂纯化和SDS-PAGE切胶分离目的 蛋白,溶胶后以表达的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠.ELISA检测抗体效价,PAS染色检测主动免疫后曲细精管的发育.结果 经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的 蛋白ACTL7a,纯化后免疫ICR小鼠,经PAS染色发现主动免疫ACTL7a的小鼠其睾丸曲细精管出现生精细胞脱落、核凝聚、生精细胞缺如、生精细胞退化等异常的管腔.结论 成功构建了ACTL7a基因全长的原核表达载体,经诱导表达和纯化获得高纯度的目的 蛋白.发现ACTL7a蛋白主动免疫ICR小鼠产生抗精子抗体后,小鼠睾丸的曲细精管发生严重损伤.