超声联合载GDNF逆转录病毒微泡开放血脑屏障治疗帕金森病

摘要

目的:制备载胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的逆转录病毒超声微泡MpLXSN-GDNF,探讨MpLXSN-GDNF联合超声开放血脑屏障对帕金森病(PD)模型大鼠的治疗作用。方法:制备载逆转录病毒载体pLXSN-GDNF、pLXSN-EGFP微泡造影剂。将SD大鼠分为4组:(1)Normal组,为未进行处理的正常大鼠;(2)U+MpLXSN-EGFP组,尾静脉注射4×10~7载pLXSN-EGFP微泡并用超声照射受损脑区;(3)U+MpLXSN-GDNF组,尾静脉注射4×10~7载pLXSN-GDNF微泡并用超声照射受损脑区;(4)U+M+pLXSN-GDNF组,尾静脉注射4×10~7微泡及pLXSN-GDNF病毒并用超声照射受损脑区。MRI实时引导聚焦超声联合载GDNF或EGFP基因的逆转录病毒的微泡辐照大鼠颅脑纹状体开放血脑屏障,促逆转录病毒透过血脑屏障转染该区域的神经元细胞而增加目的基因表达。免疫印迹法检测各组大鼠脑组织GDNF表达,旋转实验评价颅内GDNF表达增加对大鼠行为学的影响,免疫组化法测定脑组织酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元细胞数目。结果:免疫印迹检测脑组织GDNF蛋白表达显示,U+MpLXSN-EGFP组、U+M+pLXSN-GDNF组与Normal组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。旋转实验显示,处理8周后U+M+pLXSN-GDNF组大鼠旋转症状较治疗前明显好转(P<0.05)。免疫组化法检测各组大鼠脑内TH阳性神经元细胞数量显示,U+MpLXSN-EGFP组、U+M+pLXSN-GDNF组、U+MpLXSN-GDNF组较Normal组均显著降低,而U+MpLXSN-GDNF组较U+M+pLXSN-GDNF组显著增加(均P<0.05)。结论:超声联合载GDNF病毒微泡可以增加脑内神经细胞的转染效率,并高表达外源基因GDNF,从而对PD模型大鼠起到治疗作用。