丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6的反式调节基因研究

摘要

目的:筛选、克隆新基因HCBP6转染肝癌细胞后的反式调节基因,探索HCBP6基因表达对肝细胞基 因表达谱的影响。方法:应用酵母双杂交技术和生物信息学(bioinformatics)技术,筛选得到的人HCV核心蛋白结 合蛋白6(HCBP6)的基因。构建HCBP6基因的真核表达载体pcDNA3.1( ) HCBP6,应用抑制性消减杂交技术对 重组表达质粒pcDNA3.1( ) HCBP6转染的HepG2细胞和空载体转染的相同细胞差异表达的mRNA进行研究,将 富集的二次PCR产物与T/A载体连接,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆聚合酶链反应(PCR)扩增后 进行测序及同源性分析。结果:消减文库扩增后得到30个阳性克隆,菌落PCR分析显示,其中24个克隆含有200 ～1000bp插入片段。对插入片段测序,并通过生物信息学分析,结果共获得11种蛋白编码基因。结论:应用SSH 技术成功筛选了HCBP6对肝癌细胞的反式调节基因,本实验结果对初步探索新基因的功能提供重要的信息,为进 一步阐明HCV核心蛋白与HCBP6相互作用后的肝细胞生物大分子变化提供了理论依据。