酵母双杂交技术筛选人肝cDNA文库中与肺癌转移相关蛋白作用的蛋白

摘要

目的采用酵母双杂交系统从人肝cDNA文库筛选肺癌转移相关蛋白1（1ungcancer metastasis—related protein1，LCMR1）的相互作用蛋白，为进一步研究LCMR1功能提供线索。方法构建酵母双杂交诱饵质粒（pGBKT7-LCMR1），转化至AH109感受态酵母菌，在融合蛋白表达、自激活活性及宿主毒性检测后，应用酵母双杂交筛选与LCMR1相互作用的蛋白。除去阳性克隆中多余质粒后，用PCR和酶切方法减少重复克隆，并经共转化重复检测相互作用后得到真阳性克隆。对真阳性克隆进行测序及生物信息学分析。结果成功构建pGBKT7-LCMR1诱饵质粒，融合蛋白成功表达且无自激活和毒性作用。初步筛选获得72个阳性克隆，去除多余质粒、经共转化重复验证后，得到阳性克隆14个。经基因和蛋白质测序得到编码序列7个：核糖体蛋白L29、核糖体蛋白S15a、铁调素抗菌肽、补体C3、线粒体ND4L、线粒体ND1、细胞色素P450，其余7个为非编码序列。结论利用酵母双杂交技术在人肝cDNA文库中成功筛选出与LCMRI相互作用的蛋白7个，为进一步研究LCMRI功能提供了新线索。