Caracterisation moleculaire et fonctionnelle de CIF1P, une proteine orpheline impliquee dans le phenomene epigenetique de viabilite de la levure S. pombe en absence de la chaperone calnexine.

摘要

Le repliement des proteines est un processus cellulaire crucial impliquant plusieurs proteines dont la calnexine, une chaperone du reticulum endoplasmique. Notre laboratoire et un autre groupe avons demontre que la calnexine est essentielle a la viabilite de la levure Schizosaccharomyces pombe. Dans le cadre d'etudes structure-fonction portant sur cette proteine, nous avons decouvert un phenomene permettant la viabilite des cellules en absence de la calnexine. Cet etat, nomme Cin pour calnexine independence, est induit par un mutant de la calnexine depourvu du domaine central hautement conserve (Deltahcd_Cnx1p). La caracterisation de l'etat Cin a revele plusieurs caracteristiques particulieres telle la dominance, sa transmission de facon non-Mendelienne a la progeniture meiotique et sa transmission par des extraits proteiques depourvus d'acides nucleiques. Toutes ces proprietes suggerent donc que l'etat Cin est medie via un element de type prion.;Lors d'etudes visant a elucider la fonction cellulaire de Cif1p, il a ete etabli qu'elle interagissait avec certaines proteines de la grosse sous-unite du ribosome telle la proteine L3. Cependant, Cif1p ne co-sedimente pas avec des sous-unites ribosomales assemblees, des ribosomes ou des polysomes. De plus, des cellules contenant une deletion genomique de cif1 voient leur contenu en ribosomes perturbe lors de la phase stationnaire. Il semble donc que Cif1p joue un role dans la biosynthese des ribosomes lors de la phase stationnaire. Ce role specifique a cette phase de croissance coincide avec un clivage de la portion N-terminale de Cif1p, clivage qui a lieu lors de l'entree des cellules en phase stationnaire. De plus, des etudes effectuees recemment dans notre laboratoire proposent que la calnexine joue un role important dans la signalisation de l'apoptose, et ce particulierement en phase stationnaire. Ainsi, une voie impliquant Cif1p, sa fonction nucleolaire dans la biosynthese des ribosomes en phase stationnaire, la calnexine et la mediation de l'apoptose semble se dessiner. D'autres travaux, notamment sur la fonction exacte de Cif1p, le role de son clivage et les autres composantes impliquees dans le phenomene Cin nous permettront de dessiner un portrait plus complet de cette voie cellulaire inedite.;Mots-cles: Chaperone, Calnexine, Schizosaccharomyces pombe, Prion, Nucleole, Ribosome, Phase stationnaire;Le gene cif1+, pour calnexin independence factor, a ete isole lors de criblages visant a identifier des genes impliques dans l'etat Cin. Il encode pour une proteine orpheline dont la surexpression induit de facon stable un etat de viabilite en l'absence de la calnexine. Cet etat differe genetiquement et phenotypiquement de l'etat Cin induit par le mutant Deltahcd_Cnx1p prealablement caracterise, ce qui suggere deux voies paralleles de signalisation du phenomene Cin. Une caracterisation exhaustive de Cif1p a permis de demontrer qu'il ne s'agissait pas du prion responsable de l'etat Cin, malgre que cette proteine possede certaines proprietes typiques des prions in vitro. Finalement, Cif1p est une proteine nucleolaire dont la bonne localisation est essentielle a sa capacite a induire l'etat Cin. Ceci suggere une interaction entre la fonction essentielle de la calnexine et une fonction executee dans le nucleole.