Etude de la structure moleculaire et du ciblage de deux endopeptidases de la bordure en brosse de rein: L'endopeptidase neutre-24.11 (neprilysine) et l'endopeptidase-24.18 (meprine).

摘要

ans le but d'etudier ces phenomenes de ciblage, nous nous commes particulierement interesses a la structure moleculaire et au ciblage de deux metallo-enopeptidases a zinc de la membrane de la bordure en brosse renale; l'endopeptidase neutre-24.11 (neprilysine) et l'endopeptidase-24.18 (meprine).;La neprilysine est une proteine transmembranaire de type II. Elle possede un court fragment de 27 residus localise a l'interieur de la cellule, une region hydrophobe de 23 residus qui ancre la proteine dans la membrane plasmique et un grand domaine extracellulaire hydrophile de 699 acides amines contenant le site actif de l'enzyme. Afine d'identifier le domaine de cette ectoenzyme qui contient l'adresse moleculaire responsable de son ciblage vers la bordure en brosse des cellules epitheliales, nous avons reconstitue un modele cellulaire de ciblage d'une forme soluble de la neprilysine dans la lignee cellulaire polarisee "Madin-Darby Canine Kidney" (MDCK). Dans la forme soluble de l'enzyme, ses domaines cytosolique et transmembranaire ont ete substitues par le peptide signal de la pro-opiomelanocortine. Nos resultats ont montre que la neprilysine recombinante est majoritairement secretee dans le milieu apical par les cellules MDCK cultivees en monocouche sur filtres semipermeables. Ces donnees indiquent clairement que l'ectodomaine de cette enzyme renferme le signal de ciblage. La nature de ce signal demeure toutefois inconnue.;La meprine se distingue de la neprilysine par son insensibilite au phosphoramidon, un puissant inhibiteur de l'enzyme bacterienne thermolysine. La meprine est composee de deux sous-unites distinctes,