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【24h】

Directed evolution and structure-assisted random mutagenesis to enhance enantioselectivity of an esterase from Pseudomonas fluorescens.

机译:指导进化和结构辅助随机诱变,以增强荧光假单胞菌酯酶的对映选择性。

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摘要

By screening a low number of Pseudomonas fluorescens (PFE) mutants, directed evolution identified a mutant with modestly improved enantioselectivity (from Ewild-type = 12 to EThr230Ile = 19) toward the useful chiral synthon methyl 3-bromo-2-methylpropionate (MBMP). A homology model of HE revealed that the mutation was far away from the enzyme active site and may contribute to increased enzyme flexibility.; In a second approach to improving enantioselectivity of PFE toward MBMP, the homology model was used to select amino acid residues near the stereocenter of the docked tetrahedral intermediate of the substrate. Randomization of these residues yielded a Trp29Leu mutant with E increased to 58, as well as a Phe199Trp mutant with E decreased to 2.
机译:通过筛选少量的荧光假单胞菌(PFE)突变体,定向进化鉴定出一个对有用手性合成子3-溴-2-甲基丙酸甲酯(MBMP)具有适度提高的对映选择性的突变体(从Ewild型= 12到EThr230Ile = 19)。 。 HE的同源性模型显示该突变远离酶活性位点,并且可能有助于增加酶的柔韧性。在改善PFE对MBMP的对映选择性的第二种方法中,使用同源性模型来选择底物对接四面体中间体的立体中心附近的氨基酸残基。这些残基的随机化产生E增加至58的Trp29Leu突变体,以及E减少至2的Phe199Trp突变体。

著录项

  • 作者

    Horsman, Geoffrey Paul.;

  • 作者单位

    McGill University (Canada).;

  • 授予单位 McGill University (Canada).;
  • 学科 Biology Microbiology.; Chemistry Biochemistry.
  • 学位 M.Sc.
  • 年度 2002
  • 页码 58 p.
  • 总页数 58
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 eng
  • 中图分类 微生物学;生物化学;
  • 关键词

  • 入库时间 2022-08-17 11:46:04

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