Identification et caracterisation d'un locus de fimbriae de type IV chez Actinobacillus pleuropneumoniae.

摘要

Actinobacillus pleuropneumoniae est une bacterie importante qui affecte le porc, causant ainsi une pleuropneumonie contagieuse. L'adhesion de ce microorganisme aux cellules epitheliales des poumons du porc est l'etape initiale lors de la colonisation de l'hote. Les fimbriae sont regulierement utilises par plusieurs bacteries pathogenes pour s'attacher aux membranes muqueuses. Ils sont de plus tres antigeniques et sont utilises avec succes comme vaccin contre plusieurs bacteries pathogenes. Tout d'abord decouvert chez Actinobacillus actinomycetemcomitans , le locus des genes flp-rcp-tad encode un systeme de secretion pour la synthese et l'assemblage de fimbriae de type IV. Chez A. actinomycetemcomitans, la proteine Flp1 est impliquee dans l'adhesion de la bacterie, tandis que le role du gene flp2 n'est pas encore connu. Nous avons identifie les genes flp1 et flp2 chez A. pleuropneumoniae et les proteines encodees par ces genes pourraient etre de bons candidats pour la vaccination contre A. pleuropneumoniae. Nous avons ensuite tente de verifier l'immunogenicite de ces deux proteines. Nous avons tout d'abord amplifie par PCR les genes qui encodent les proteines Flp1 et Flp2 d'A. pleuropneumoniae du serotype 1. Nous avons ensuite clone ces fragments dans le vecteur d'expression pQE30. Les cellules competentes Escherichia coli M15 (pREP4) ont ete transformees avec chacunes des constructions et les clones ont ensuite ete induits pour la production des proteines Flp1 et Flp2 par l'ajout d'IPTG. Nous avons utilise comme anticorps primaire lors du Western-blot, un serum de porc convalescent infecte par A. pleuropneumoniae de serotype 1. Ce serum a reagit avec la proteine Flp1. Ces resultats nous indiquent que cette proteine induit une reponse immunitaire chez le porc et pourrait alors etre un bon candidat pour la fabrication d'un vaccin contre A. pleuropneumoniae.; Mots cles: Actinobacillus pleuropneumoniae ; fimbriae; flp1; flp2; facteur de virulence; proteines antigeniques; proteines recombinantes.