高龋学龄前儿童变形链球菌水平传播的研究

摘要

龋病是危害儿童口腔健康的常见疾病,变形链球菌(变链菌, Streptococcus mutans)是引起乳牙龋病的主要致病菌之一,变形链球菌在儿童口腔中的早期定植对儿童龋病的发生具有重要影响。所以,研究儿童口腔变形链球菌的来源及传播关系,对儿童龋病的防治具有指导意义。
　　大量研究表明,儿童口腔中的变形链球菌不仅存在母系垂直传播、父系传播,还存在密切接触者间的水平传播。随着儿童年龄的增长,社交范围的扩大,特别是在幼儿园期间的集体生活,变形链球菌通过除家庭成员外的密切接触者进行水平传播成为可能。因此,研究变形链球菌在高龋儿童间的水平传播关系将为儿童龋病的防治提供基础。
　　我们首先通过细菌形态学观察、生物化学及分子生物学鉴定方法从20名4-5岁高龋学龄前儿童口腔牙菌斑中分离鉴定出181株变形链球菌临床分离株;然后应用随机引物聚合酶链反应(AP-PCR)方法,鉴定出37种不同基因型,其中6名儿童携带1种基因型,11名儿童携带2种基因型,2名儿童携带3种基因型,1名儿童携带4种基因型,发现2名不同班级儿童携带一种相同基因型,认为在20名高龋儿童中未发现变形链球菌的水平传播关系;最后,采用微孔板培养法,对10株不同基因型变形链球菌分离株(变形链球菌国际标准株Ingbritt、拥有相同基因型的2名儿童所携带的4种不同基因型变形链球菌临床分离株、实验小组已分离验证的5株高、低致龋性变形链球菌临床分离株)进行7个不同时间点成膜量的测定。发现:1、变形链球菌的体外成膜量在培养16h.-36h.逐渐增加,36h.达最大值,之后成膜量下降;2、课题小组前期分离获得的5株变形链球菌临床分离株,除2号菌株外,其它4株的成膜能力检测结果与前期进行的高、低致龋性的鉴定结果一致;3、2名儿童高发龋病的原因可能是他们分别携带了致龋能力强的7号和8号基因型菌株的结果,其共同携带的9号基因型菌株不是其成为高龋儿童的直接原因。
　　本研究在20名高龋学龄前儿童间未发现变形链球菌的水平传播关系,分析了携带相同基因型菌株的2名儿童高发龋病的可能原因;利用成膜能力实验初步探讨变形链球菌体外成膜规律,为变形链球菌致龋特性的进一步研究提供基础;分离验证9株变形链球菌临床分离株的致龋特性,为下一步研究提供了不同致龋特性的可靠菌株。

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前言

第一部分 高龋学龄前儿童变形链球菌临床分离株的分离鉴定和基因分型

一、 实验材料[7,8]

1.1 菌株

1.2培养基

1.3主要材料和试剂

1.4主要仪器

1.5主要试剂的配制

二、 实验方法[11,12]

2.1 病例选择

2.2 菌斑采集与处理

2.3 变链菌临床分离株的培养、分离

2.4 变形链球菌临床分离株的鉴定

2.5 基因分型

三、 实验结果

3.1 菌落检测及细菌形态学鉴定

3.2 变链菌生化鉴定

3.3 变链菌分子生物学鉴定

3.4 基因分型鉴定

四、 讨论

五、 小结

参考文献

第二部分 不同基因型变形链球菌临床分离株体外成膜能力的研究

一、 实验材料

1.1 菌株

1.2 培养基

1.3 主要材料和试剂

1.4 主要仪器

1.5 主要试剂的配制：

二、 实验方法

2.1 菌种复苏与传代

2.2 菌悬液制备

2.3 生物膜形成与测定

三、 实验结果

3.1 菌株形成生物膜情况

3.2 细菌生物膜的结构观察

3.3 菌株成膜能力分析（表2，图2.2）

3.4 菌株成膜量随培养时间变化结果分析（图2.3-图2.12）

四、 讨论

五、 小结

参考文献

全文总结

综述

个人简历

致谢