三七的18S rRNA， matK基因序列和HPLC化学指纹图谱检测与分析研究

摘要

目前中药质量标准化多从化学成分及其含量方面进行考察,而作为质量标准化的前提和关键的品种标准化则已经深入到分子水平进行检测分析,从分子生物学的角度为中药物种的地理分布和分化变异判定提供了科学依据.该研究的目的是基于基因和化学指纹图谱检测两个方面来分析名贵中药三七的18S rRNA和matK基因的分子特征和三七的化学指纹特征.方法:①利用分子生物技术平台,对不同产地的三七以及常见伪品进行基因组DNA的提取、PCR扩增、序列测定,分析三七及其常见伪品的基因序列差异,以及不同产地三七的DNA分子特征.②利用HPLC的化学分析技术,对不同产地三七和三七不同药用部位进行化学指纹图谱分析,明确产地对三七化学成分的影响,以及三七不同部位的指纹特征.结论:①不同产地三七的DNA序列没有出现差异,除其本身的遗传特征可能具有高度的保守性外,还有可能是长期的栽培过程中,种质资源已趋一致所造成的结果.基因序列标记能从分子水平定性分辨三七及其伪品的遗传背景差异,为中药品种标准化提供了先进可行、稳定可靠的分子标准,为经典中药材品质评价进行了有益的方法学探索.②HPLC指纹图谱分析可以直观地为三七的化学成分定性并定量,不同产地的三七主要峰相似,但峰的数量有所差异,至于差异峰是否可以代表产地的特征峰,还需收集更多批次的样品来验证.而各峰所代表的化学成分是否具有药效学价值,也有待做进一步的谱效学探讨.三七不同部位的指纹图谱尤其是花和叶的指纹特征随着花和叶的应用增多,将有望成为制定三七花、三七叶新药用资源质控标准的依据,而三七不同商品规格的特征性指纹有望成为以其为原材料的各种产品的质控标准.

目录

文摘

英文文摘

第一章引言

第一节中药鉴定方法的发展概况

第二节三七的基因鉴别分析研究现状

第三节研究目的和意义

第二章三七的18S rRNA和matK基因序列检测与分析研究

第一节文献综述

第二节材料和方法

1.材料

2.方法

第三节结果

1.植物基因组DNA的提取和纯化

2.PCR扩增

3.DNA序列测定

4.利用大肠杆菌载体保存质粒DNA

第四节讨论

1.植物基因组DNA的提取和纯化

2.PCR扩增

3.DNA序列测定

4.利用大肠杆菌载体保存质粒DNA

第五节结论

第三章三七HPLC化学指纹图谱检测与分析研究

第一节文献综述

第二节材料和方法

一.不同产地三七叶的HPLC指纹图谱分析

二.三七不同部位HPLC指纹图谱分析

第三节结果

1.不同产地三七叶HPLC指纹图谱

2.不同部位三七HPLC指纹图谱

第四节讨论

1.三七叶的特征指纹

2.三七的特征指纹

3.三七花和三七叶指纹特征区域的异同

第五节结论

第四章总结

参考文献

主要缩略语表

致谢

附录实验图表

攻读硕士学位期间发表论文情况