黄连解毒汤治疗糖尿病的机理研究

摘要

黄连解毒汤是中医方剂学中应用广泛的方剂之一,也是体现“异病同治”思想的有效经典方剂。黄连解毒汤是清热解毒的代表方剂,主治一切实火热毒,三焦热盛之证。黄连解毒汤有史以来在临床上的应用非常丰富,涉及多个系统的疾病,有较为成熟的临床研究背景。同时,根据黄连解毒汤的现代药理研究,证实了黄连解毒汤对糖尿病相关病理过程的干预有确切疗效。本课题旨在从黄连解毒汤治疗糖尿病的机理研究为切入点,进行糖尿病大鼠体内药理药效学实验,观察黄连解毒汤对糖尿病大鼠各症状的治疗作用,同时寻找该方治疗糖尿病的作用靶点,从而为黄连解毒汤“异病同治”疗效原理提供依据。
　　 本论文包括文献综述研究和实验研究两个部分。第一部分包含黄连解毒汤的历史背景、黄连解毒汤的临床应用、黄连解毒汤复方的现代药理研究、黄连解毒汤治疗糖尿病药效学研究、黄连解毒汤中各药味分别对糖尿病的治疗作用等相关研究综述。通过文献研究可以发现黄连解毒汤临床应用广泛,同时具有抗炎、抗菌、抗内毒素、抗氧化、降脂、降血糖以及抗脑缺血、抗肿瘤等多种药理作用,因此该方是“异病同治”的代表方剂。在黄连解毒汤干预众多疾病中,其对糖尿病有明显的疗效,是目前中药治疗糖尿病的关注方剂之一,近年来对其治疗糖尿病的机理研究有大量实验方面的探讨。分别对黄连解毒汤及各组成成分在降糖、降脂、对细胞因子的作用和对胰岛素信号转导的部分通路的影响等几个方面有较为深入的研究,但其治疗糖尿病的作用的机理尚未完全清楚。故本文通过观察黄连解毒汤对血糖血脂的作用、对肝脏和胰腺的重量指数的影响及对糖代谢重要器官肝脏中NF—κBp65、TNFα蛋白表达的影响进一步阐明黄连解毒汤治疗糖尿病的作用机理和靶点。
　　 第二部分为实验研究部分。首先,选择合适的方法成功的复制糖尿病模型动物。通过预实验选择较为合适的造模方法,经过几次实验摸索我们发现长期高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素能成功复制糖尿病模型,且该模型短期内不会自然恢复,比较适合用于药理实验的研究。
　　 其次,造模成功后每周检测血糖一次,三周稳定后眼球取血检测血脂血糖,从结果可以看出模型组血脂血糖指标明显高于空白组,说明造模比较成功。造模成功后开始给药,阳性对照药给予盐酸吡格列酮,按成人有效剂量10倍计算给药量,黄连解毒汤分高中低三个剂量,分别为成人有效剂量的16倍、8倍、4倍量计算大鼠给药量,连续给药8周,给药结束后取血、肝脏、胰腺分别对各指标进行检测。主要检测指标是给予黄连解毒汤后血脂、血糖情况,血清中的细胞因子及肝脏和胰腺的重量指数,在此基础上观察糖代谢重要器官肝脏中NF—κBp65、TNFα蛋白含量的表达。
　　 NF-κB是一种普遍存在的转录因子,是多种信号转导途径的汇聚点,亦是炎症的启动因子,参与许多炎症因子(如:TNFα、IL-6、CRP等)基因的表达调控,同时亦有研究证明其是高血糖和氧化应激的主要靶点,而糖尿病与多种细胞因子TNFα、IL-6、CRP等之间存在必然的联系[5-6]。由NF—κB调节的产物TNFα和IL—1β等又能反过来激活NF-κB,从而加重糖尿病症状。现代研究TNFα可导致胰岛素抵抗,其机制为TNFα干扰胰岛素信号转导,抑制葡萄糖转运作用；亦能促进脂肪细胞的脂肪分解及FFA的释放,参与和介导肝及外周组织的IR；还能降低PPARγ的mRNA表达,减少PPARγ的产生从而引起IR[7]。由上可知NF-κB和TNFα在糖尿病的发生发展过程中起着重要作用。但黄连解毒汤是否对此两个蛋白起作用并没有文献报道,我们拟从黄连解毒汤对两蛋白的调节作用来进一步发现该方治疗糖尿病的作用机理。
　　 从结果分析看黄连解毒汤高、中剂量组能显著降低大鼠血清中CHO、TG、LDLC含量,升高HDLC含量,明显降低肝脏和胰腺的重量指数；大鼠肝脏NF—κB、TNFα蛋白的表达明显低于模型组,且具有显著性差异。提示黄连解毒汤对高脂饮食加小剂量STZ所致糖尿病大鼠有一定的治疗作用,可能的作用机制是通过调节NF—κB、TNFα蛋白的表达,从而抑制炎症信号通路来改善糖尿病症状。
　　 本实验为黄连解毒汤治疗糖尿病的药理药效学研究提供实验依据,进而为黄连解毒汤在临床上治疗糖尿病提供一定的科学依据,亦为中药方剂“异病同治”物质基础研究提供借鉴。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词

第一部分 相关文献综述研究

1 、黄连解毒汤背景概述

2 、黄连解毒汤临床应用

3 、黄连解毒汤现代药理学和药化学研究

4 、糖尿病的相关研究

4.1 糖尿病的中医证候研究

4.2 肥胖、炎症与糖尿病的关系

4.3 糖尿病大鼠模型制备方法研究

5 、黄连解毒汤治疗糖尿病的药理药效学研究

第二部分 实验研究

前言

1 、糖尿病模型大鼠的制备

1.1 实验材料

1.2 实验动物及饲料

1.3 模型制备

2 、造模后指标检测

2.1 血液采集

2.2 指标检测

2.3 数据分析

2.4 检测结果

2.5 小结

3 、大鼠分组及给药

3.1 药液的制备

3.2 分组

3.3 灌胃给药

4 、给药期间口服糖耐量测定

4.1 给药三周后口服糖耐量检测结果

4.2 给药六周口服糖耐量

4.3 给药期间空腹血糖值测定

5 、给药结束后各指标检测

5.1 试剂

5.2 仪器

5.3 给药结束后取材

5.4 各指标检测

5.5 数据分析

5.6 检测结果

第三部分 讨论与总结

1 、黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠的降脂作用

2 、黄连解毒汤对糖尿病大鼠炎症因子的作用

3 、黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠肝脏中NF-κB和TNF-α的表达的影响

4 、结论

参考文献

致谢

硕士期间发表论文

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