基于方证相应探寻肾阴虚证的标志蛋白质

摘要

[研究背景]
　　 肾阴虚证是中医学的基本证候之一,古代医家对肾阴虚证及其辨证论治颇为重视。从20世纪50年代未,开始对。肾阴虚证本质进行实验研究,特别是近二十年来,众多学者在酶学、细胞生物学、免疫学以及分子生物学等学科中,研究发现,肾阴虚证与血液流变学、内分泌、免疫、物质与能量代谢、微量元素、生化、酶以及基因表达等多方面异常有关,初步证实其具有现代的病理生理学基础,并且取得了一定的成绩。
　　 但是,迄今为止,肾阴虚证的本质研究还没有一个定论。而众所周知,蛋白质是基因的最终表现形式,是生物功能的主要体现和执行者。因此,本课题基于方证相应,运用蛋白质组学技术对肾阴虚证本质进行研究,以期在蛋白质水平上探讨肾阴虚证的致病机理,从而为肾阴虚证本质的研究找出一条新的途径。
　　 [研究目的]
　　 本课题基于方证相应,探寻肾阴虚证的标志蛋白,以期在蛋白质表达水平上探讨肾阴虚证的本质,进而阐述肾阴虚证的发生机制。
　　 [方法]
　　 将SD大鼠随机分为3组:正常组、肾阴虚证模型组和左归饮组。肾阴虚证模型组:大鼠给予甲状腺片悬液灌胃造模；左归饮组:按同种方法制作肾阴虚证模型后,给予左归饮灌胃；正常对照组:给予同体积水灌胃。给药结束后,将大鼠麻醉,取其血清、肝、肾组织。应用蛋白质双向凝胶电泳技术分析比较三组肝、肾和血清之间蛋白质的表达,找出左归饮调节纠正的肾阴虚证的差异蛋白质点,这些蛋白质即为肾阴虚证标志蛋白质；之后通过质谱鉴定蛋白质,并且通过Western-blot加以验证。通过对肾阴虚证标志蛋白质功能的了解,在蛋白质表达水平上阐述肾阴虚证的发生机理。
　　 [结果]
　　 1.经Image Master2D Platinμm6.0软件分析,在相同条件下不同组织的双向凝胶电泳图谱识别的蛋白质点个数:肝组织为(1473±32),肾组织为(1351±28),血清为(318±34)。根据3倍差异表达做为标准,左归饮将肾阴虚模型组非正常表达的蛋白质调节纠正为正常表达的蛋白质,共检测出21个。
　　 2.对21个差异蛋白质点进行MALDI-TOP质谱鉴定,18个蛋白质点获得准确的鉴定结果。其中,在肾阴虚证大鼠组织中高表达而被左归饮纠正为正常的蛋白质有酪氨酸-DNA磷酸二酯酶、酪氨酸蛋白激酶6、α-烯醇化酶、原钙粘蛋白、钙调蛋白等；在肾阴虚证大鼠组织中低表达而被左归饮纠正为正常的蛋白质有氨甲酰磷酸合成酶1、过氧化物酶1、信号识别颗粒9、果糖磷酸醛缩酶A等。这些差异蛋白质的功能主要涉及机体物质代谢、信号传导、抗氧化等。
　　 3.western-blots寸果糖醛缩酶A蛋白在3组中的表达进行验证,结果表明果糖醛缩酶A在各组大鼠中均有表达,在肾阴虚模型组表达水平最低,这与凝胶分析和质谱鉴定结果完全相符。
　　 [结论]
　　 1.实验筛选并鉴定18个肾阴虚证标志蛋白质,其中,在肾阴虚证大鼠组织中高表达而被左归饮纠正为正常的蛋白质有酪氨酸.DNA磷酸二酯酶、酪氨酸蛋白激动6、α-烯醇化酶、原钙粘蛋白、钙调蛋白等；在肾阴虚证大鼠组织中低表达而被左归饮纠正为正常的蛋白质有氨甲酰磷酸合成酶1、过氧化物酶1、信号识别颗粒9、果糖磷酸醛缩酶A等。这些差异蛋白质的功能主要涉及机体物质代谢、信号传导、抗氧化等。在蛋白质表达水平上初步探讨了肾阴虚证的发生机理。
　　 2.蛋白质印迹实验证明凝胶分析和质谱鉴定结果是一致的。
　　 3.基于方证相应,运用蛋白质组学研究技术,在蛋白质表达水平上探寻肾阴虚证的本质是可行的。

目录

文摘

英文文摘

文献综述

综述一 古代医家对肾阴虚证的认识

综述二 肾阴虚证本质的现代研究进展

前言

第一部分 肾阴虚证大鼠的组织蛋白质双向凝胶电泳分析

1 材料

2 方法

3 结果

第二部分 双向凝胶电泳差异表达蛋白质的质谱鉴定

第三部分 差异蛋白质的印迹验证

1 材料

2 实验方法

3 结果

讨论

小结

结论

参考文献

致谢

简历