HB-EGF转基因小鼠的建立和功能研究

摘要

扩张性心肌症是最常见的心脏疾病之一，是导致心脏衰竭的第三大常见原因。选择性ErbB2剔除的小鼠为研究ErbB2受体特异的抑制剂赫赛汀所引起的扩张性心肌病和心力衰竭提供了动物模型。现已证实ErbBs信号系统在胚胎期心脏的发育过程中和维持成体心脏的功能方面都具有重要的作用。HB-EGF是ErbB受体的主要配体之一，HB-EGF通过ErbB受体介导的信号通路在维持心脏的正常功能和心脏瓣膜的发育中起非常重要的作用。 我们建立了动物模型来进一步阐明HB-EGF和ErbB受体在心脏功能和发育中的作用。本论文分为两个部分，第一部分：建立HB-EGF的转基因动物模型。第二部分：利用转基因动物模型研究HB-EGF的功能。 首先我们构建了α-MHC-HB-EGF表达载体。为了提高HB-EGF在小鼠体内的表达，将HB-EGF的编码序列插入到在小鼠心脏组织中特定表达的α-MHC启动子的下游，然后酶切成线性DNA。把构建的线性α-MHC-HB-EGF注射到受精卵的雄原核中，使其发育成携带有HB-EGF的转基因小鼠。通过PCR的方法鉴定转基因的首建鼠。我们得到了两只HB-EGF阳性的首建鼠。Westernblotting发现16号小鼠中HB-EGF在心脏中的表达与同窝阴性对照小鼠相比蛋白表达明显增加。 取HB-EGF在心脏中特异性高表达的16号阳性转基因小鼠的F1代与同窝阴性对照小鼠，腹腔注射BrdU(每kg体重10ml)，2h后取出心脏，固定于4％多聚甲醛中，做石蜡切片，用小鼠生物素标记的BrdU抗体和辣根过氧化物酶标记的二抗进行心脏的BrdU染色，发现：转基因阳性小鼠的阳性细胞数明显多于阴性对照组的阳性细胞数，结果提示：HB-EGF的高表达可以促进心肌细胞的增殖。 另外，将心脏组织用中性甲醛液固定，石蜡切片，做Masson染色。光镜下观察：胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。结果证实阳性转基因小鼠F1代的胶原纤维明显少于同窝阴性对照的小鼠。因此，我们证实了HB-EGF可以减少胶原纤维生成，抑制心肌的纤维化。

目录

摘要

缩略词

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

文献综述扩张性心肌病研究的新进展

个人简历

致谢