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论文说明:英文名词及缩写
声明
摘要
前言
1.人β-珠蛋白基因簇与真核基因表达调控研究
1.1人β-珠蛋白基因簇的结构特点
1.2人β-珠蛋白基因簇是研究真核基因表达调控的经典模型
1.3表观遗传调控与人类遗传疾病的关系
2.人β-珠蛋白基因簇相关的分子遗传病
2.1 β-地中海贫血和镰刀型贫血病及其发病机制
2.2人γ-珠蛋白基因的激活表达是治疗这类疾病的重要策略
2.3通过药物激活人γ-珠蛋白基因的表达是一条有效的途径
2.4基于表观遗传调控原理的人γ-珠蛋白基因的诱导表达与激活
2.5 P38MAPK信号通路及其在HDACi激活人γ-珠蛋白基因表达中的作用
3.本研究的理论问题与主要内容
材料与方法
1.实验材料
1.1菌株与质粒
1.2细胞系
1.3限制性内切酶及修饰酶
1.4实验用抗体
1.5其它主要试剂和材料
1.6主要仪器设备
2.实验方法
2.1基本技术路线
2.2细菌操作与质粒的转化
2.3细胞培养
2.4 Apicidin对K562和Hela细胞的不同浓度和时间的处理
2.5 Apicidin影响K562细胞增殖的MTT分析
2.6流式细胞仪检测Apicidin对K562细胞周期的影响
2.7半定量RT-PCR对人β类珠蛋白基因和红系转录因子等的表达分析
2.8 Western-Blotting分析组蛋白修饰模式和转录因子蛋白水平的变化
2.9人β类珠蛋白基因簇染色质结构和转录调控因子募集的染色质免疫沉淀(ChIP)分析
2.10限制性内切酶柔顺性实验(Restriction enzyme accessibility assay)
2.11荧光原位杂交(FISH)技术检测经Apicidin处理的β珠蛋白基因簇核定位模式
实验结果
1.Apicidin对K562细胞增殖与分化影响的分析
1.1 Apicidin对K562细胞的增殖活性具有微弱抑制作用
1.2 Apicidin可诱导K562细胞周期阻滞和凋亡
1.3 Apicidin能够诱导K562细胞向红系方向分化
1.4 Apicidin使人γ-珠蛋白基因的表达明显升高
1.5 Apicidin使GATA-1表达上调而GATA-2表达下降
2.Apicidin明显增加K562细胞总H3、H4乙酰化和H3 K4双甲基化修饰水平
3.ChIP检测Apicidin对β珠蛋白基因簇染色质组蛋白修饰状态的影响
3.1 ChIP分析条件的建立
3.2 Apicidin使人β珠蛋白基因簇LCR区活性组蛋白修饰水平明显升高
3.3 Apicidin使人γ和ε启动子、5'区及基因间区活性组蛋白修饰发生动态变化
4.Apicidin可激活P38 MAPK信号通路而瞬时抑制ERK通路
5.P38 MAPK通路的阻断抑制了Apicidin的诱导作用
6.P38 MAPK通路的阻断使Apicidin处理下β珠蛋白基因簇组蛋白修饰水平下降
7.P38 MAPK通路的阻断抑制了Apicidin促使的GATA-1表达上调
8.人β珠蛋白基因启动子和LCR区RNA Pol Ⅱ和转录因子的结合分析
8.1 Apicidin使β珠蛋白基因簇募集Pol Ⅱ的水平明显升高,且不受P38 MAPK通路的调节
8.2 Apicidin处理和P38 MAPK信号通路阻断前后转录因子的结合分析
9.Apicidin可明显促使人β-簇从CT区的环出
讨论
1.Apicidin可诱导增强γ-珠蛋白基因的表达并具备潜在的临床应用前景
2.Apicidin与P38 MAPK通路协同作用提高β-簇染色质活性状态以激活人γ-珠蛋白基因的表达
2.1 LCR、ε与γ基因间区组蛋白乙酰化水平的显著增加加强了染色质成环作用
2.2基因间转录与pol Ⅱ的募集是Apicidin增强γ-珠蛋白基因表达的潜在分子机制
2.3 P38 MAPK信号通路的阻断可能破坏了组蛋白共价修饰间的协调作用
2.4组蛋白乙酰化转移酶可能介导了P38 MAPK通路参与增强γ-珠蛋白基因的表达
3.GATA-1、SP1、NF-E2/P45可能参与Apicidin、P38 MAPK通路协同增强人γ-珠蛋白基因的表达
3.1 GATA-1
3.2 NF-E2
3.3 SP1
4.Apicidin影响β-珠蛋白基因簇核定位及其潜在的分子基础
5.本研究不足之处和今后的工作设想
小结
参考文献
文献综述 REVIEW ARTICLE Charting gene regulatory networks:strategies,challenes and perspecives
致谢
个人简历
北京协和医学院;
清华大学医学部;
中国协和医科大学;
中国医学科学院;