CRP和HDL对THP-1来源的巨噬细胞LOX-1表达的影响及其相关信号转导通路研究

摘要

背景:动脉粥样硬化(As)的病理变化存在变质、渗出和增生等炎症的基本特征，已被公认为是一种慢性血管炎症反应。氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)是As形成和发展的关键因素，具有氧化应激和促炎效应。oxLDL通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)与血管内皮细胞(VEC)相互作用引起VEC损伤及内皮功能障碍是As病理变化的始动环节。而oxLDL增强巨噬细胞对脂质的吞噬作用是As斑块的形成和体积进展的核心步骤，该过程涉及巨噬细胞表面多种oxLDL受体，其中包括LOX-1。但目前对巨噬细胞上LOX-1的表达调控及其参与血管炎症反应病理生理过程的了解甚少。 C反应蛋白(CRP)是由肝脏产生的急性期反应蛋白，它作为一种炎症因子直接参与As的形成，可加速巨噬细胞对氧化脂质的摄取，促进泡沫细胞形成。高密度脂蛋白(HDL)具有抗氧化和抗炎症的血管保护作用，它抑制多种炎性细胞因子和粘附分子的产生，并通过减少胞内脂质蓄积，诱导巨噬细胞凋亡等过程减轻As血管炎症反应。因此研究CRP和HDL对巨噬细胞表面LOX-1表达的影响，有助于深入了解该受体在参与巨噬细胞炎症反应过程中的特殊地位和功能。 目的:本实验以体外培养的THP-1来源的巨噬细胞为对象，研究CRP和HDL对LOX-1表达的影响，并观察其相关信号转导通路，以了解巨噬细胞表面LOX-1表达的调控因素和病理生理意义，及其与动脉粥样硬化血管炎症反应的关系。 方法: 1.采用PRMI1640培养基传代培养人单核细胞系(THP-1)，经PMA诱导分化为巨噬细胞，并用免疫组化的方法加以鉴定。 2.在细胞水平，采用免疫组化、免疫荧光法检测CRP和HDL对THP-1来源的巨噬细胞LOX-1蛋白表达的影响，细胞原位ELISA法定量检测CRP和HDL对LOX-1抗原表达的影响，半定量RT-PCR法检测CRP和HDL对LOX-1mRNA表达的影响。 3.在细胞水平，采用免疫组化法检测多种信号通路抑制剂和CRP共同作用对THP-1来源的巨噬细胞LOX-1蛋白表达的影响，细胞原位ELISA法定量检测多种信号通路抑制剂和CRP共同作用对LOX-1抗原表达的影响，半定量RT-PCR法检测多种信号通路抑制剂和CRP共同作用对LOX-1mRNA表达的影响。 4.在细胞水平，采用免疫组化法检测CRP和HDL对THP-1来源的巨噬细胞内磷酸化-MAPK蛋白表达的影响，ELISA法定量检测CRP和HDL对磷酸化-MAPK抗原表达的影响。 结论: 1.促炎的CRP和抗炎的HDL都能引起THP-1来源的巨噬细胞表面LOX-1表达上调，提示LOX-1并不是介导巨噬细胞参与炎症反应病理生理变化的关键性受体。 2.CRP可通过NF-κB信号通路促进巨噬细胞表面LOX-1的表达。 3.CRP和HDL激活不同的MAPK通路蛋白，推测由此引起巨噬细胞内不同的病理生理变化。该通路可能与LOX-1表达相关。

目录

缩写词表

摘要

前 言

实验材料

第一部分CRP和HDL对THP-1来源的巨噬细胞LOX-1表达影响的研究

实验方法

实验结果

讨论

局限

小结

参考文献

第二部分THP-1来源的巨噬细胞LOX-1表达调节过程中相关信号转导通路的研究

综述LOX-1与动脉粥样硬化

志谢

个人简历