声明
中 文 摘 要
前言
1肝纤维化与原代肝星状细胞
2 自噬概述
3 MiRNAs与自噬
4 MiR-148a与HSCs自噬
5本实验的研究内容
实 验 材 料
1、实验动物
2、主要试剂
3、主要仪器
实 验 方 法
1、主要实验试剂配制
2、提取大鼠原代HSCs
2.1肝纤维化造模
2.2验证肝纤维化
2.3 HSCs的分离术前准备
2.4分离HSCs
3、基本方法
3.1 细胞培养
3.2 细胞传代
3.3 细胞冻存
3.4 细胞复苏
4、细胞转染
5、透射电镜观察细胞自噬小体情况
6、Western blot检测原代HSCsLC3-Ⅱ、SQSTM1/P62的表达及LC3类别转换
6.1总蛋白抽提
6.2 蛋白样品初步定量
6.3 SDS-PAGE电泳
6.4 蛋白质转移
6.5 免疫印记
7、激光扫描共聚焦显微镜检测绿色荧光斑点
7.1共转染
7.2激光扫描共聚焦显微镜观察细胞绿色荧光斑点情况
7、统计学分析
实 验 结 果
1、肝纤维化验证
2、透射电镜观察HSCs自噬小体
3、Western blot检测原代HSCs自噬相关蛋白的表达
4、激光扫描共聚焦显微镜检测GFP-LC3绿色荧光蛋白
讨论
一、MiR-148a与原代HSCs自噬
二、HSCs自噬与肝纤维化
三、总结与展望
结论
参 考 文 献
部 分 缩 略 词 表
在校期间发表论文、专利及参与科研情况
致谢
暨南大学;