以同种异基因型胶质瘤细胞及其裂解物与同基因型胶质瘤细胞裂解物作为免疫原的混合疫苗治疗大鼠胶质瘤

摘要

目的：本研究探讨以同种异基因型的 C6胶质瘤细胞及其裂解物与同基因型的9L胶质瘤细胞裂解物作为免疫原的疫苗对大鼠胶质瘤的治疗作用，以及经该疫苗治疗后大鼠胶质瘤组织的侵袭力变化情况，以期为胶质瘤的免疫治疗提供更多的可行性方案。　　方法：　　（1）采用立体定向技术，将1×106/10μl个9L胶质瘤细胞悬液注入Fisher344大鼠右侧尾状核区，建立9L/Fisher344大鼠胶质瘤原位模型。　　（2）接种后的大鼠随机分为三组：空白组，二十万单位治疗组，三十万单位治疗组，每组各10只。其中空白组大鼠不接受治疗；二十万单位治疗组大鼠皮下注射以C6细胞（2×105个）、C6细胞裂解物（含2×105个细胞）及9L细胞裂解物（含2×105个细胞）作为免疫原的疫苗；三十万单位治疗组大鼠皮下注射以C6细胞（3×105个）、C6细胞裂解物（含3×105个细胞）及9L细胞裂解物（含3×105个细胞）作为免疫原的疫苗。所有治疗均于接种9L细胞后第1天进行。　　（3）以50天为大鼠生存观察期，记录其生存状况及生存时间。于接种9L细胞后第10、20、30、40、50天对所有大鼠行MRI检查，动态观察大鼠胶质瘤体积变化情况。接种9L细胞后第20天，各组随机处死1只大鼠行HE染色及免疫组化Podoplanin、Fascin染色，以观察大鼠胶质瘤组织病理及侵袭能力改变情况。　　结果：　　（1）以50天为大鼠生存观察期，空白组的生存率为0；二十万单位治疗组大鼠的生存率为89％；三十万单位治疗组大鼠的生存率为100%。治疗组大鼠生存时间比空白组显著延长，差异有统计学意义（P＜0.05）；二十万单位治疗组与三十万单位治疗组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。　　（2）所有大鼠增强MRI检查均可见右侧尾状核区明显强化，本次实验制模成功率为100％。MRI动态检查发现，随瘤龄增加，空白组大鼠胶质瘤呈现持续增大，而治疗组大鼠胶质瘤呈现先增大后减小的生长趋势。接种9L细胞第20天时，计算各组肿瘤体积：空白组大鼠胶质瘤体积为(451.25±9.36）mm3，二十万单位治疗组大鼠胶质瘤体积为(122.52±22.30)mm3，三十万单位治疗组大鼠胶质瘤体积为(112.06±17.97）mm3。单因素方差分析证明空白组大鼠胶质瘤体积明显大于治疗组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；二十万单位治疗组与三十万单位治疗组之间比较，差异无统计意义（P>0.05）。　　（3）HE染色可见，空白组大鼠胶质瘤细胞密度高，排列紧密，呈巢状，部分区域伴有出血、坏死及新生血管；治疗组大鼠脑胶质瘤组织的肿瘤细胞密度稍低，典型巢状排列及新生血管少见。免疫组化Podoplanin及Fascin染色可见，空白组大鼠Podoplanin及Fascin呈强阳性表达，而在治疗组中，Podoplanin及Fascin表达均降低，且Podoplanin染色的降低程度比Fascin更加显著；二十万单位治疗组与三十万单位治疗组之间相比较，均能观察到少量的胶质瘤细胞表达Podoplanin及Fascin，两者之间无明显差异。　　结论：本研究成功建立9L/Fisher344大鼠脑胶质瘤模型，并于接种后第1天予以同种异基因型的C6胶质瘤细胞及其裂解物与同基因型的9L胶质瘤细胞裂解物作为免疫原的疫苗进行治疗。实验结果证明了该疫苗能够打破荷瘤机体对自身肿瘤的免疫耐受，诱导荷瘤机体的抗肿瘤免疫反应，防止免疫逃避的发生，延长荷瘤大鼠生存时间并降低胶质瘤组织侵袭力。

目录

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 实验方法

3 数据分析

结果

1. 9L及C6胶质瘤细胞生长观察

2. 各组大鼠生存状况

2. MRI观察肿瘤体积变化

3.大鼠脑胶质瘤病理学及免疫组化变化

讨论

1 大鼠脑胶质瘤模型的选择

2 大鼠脑胶质瘤模型的建立

3. 基于分子模拟原理含有多种胶质瘤抗原的疫苗治疗大鼠胶质瘤的疗效分析

4. 疫苗治疗时机的选择

5. 基于分子模拟原理含有多种胶质瘤抗原的疫苗对大鼠胶质瘤组织侵袭能力的影响

6. 基于分子模拟原理含有多种胶质瘤抗原的疫苗具有的优势

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述:小胶质细胞/脑巨噬细胞与胶质瘤相互关系的研究进展

声明