CRISPR系统介导的植物基因组DNA靶向去甲基化

目录

声明

第1 章 前 言

1.1 基因组DNA甲基化研究概况

1.1.2 基因组DNA 甲基化的研究进展

1.1.2 去甲基化蛋白TET1和ROS1 的发现及应用

1.2 CRISPR/Cas9 基因编辑技术的发现及研究进展

1.2.1 CRISPR/dCas9 的发现及应用

1.2.2 Cpf1蛋白的发现及应用

1.2.3 SunTag 系统的提出和应用

1.3 植物DNA甲基化的研究进展

1.4 本研究的内容、目的和意义

第2 章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 载体

2.1.2 植物材料

2.1.3 菌株

2.1.4 常用生物学试剂

2.2 实验方法

2.2.1 靶基因的挑选与引物设计

2.2.2 拟南芥基因组 DNA 靶向去甲基化载体的构建

2.2.3 菌落PCR

2.2.4 农杆菌转化（化学转化法）

2.2.5 浸花法浸染拟南芥Col-0获得转基因植株

2.2.6 T1代靶向CACTA1位点与相关转基因植株的阳性鉴定及甲基化水平的相关测定

2.2.7 T1代靶向FWA 位点与相关转基因植株的阳性鉴定及甲基化水平的相关测定

第3 章 结果与分析

3.1 成功构建拟南芥基因组DNA靶向去甲基化系统

3.1.1 拟南芥去甲基化载体骨架的构建

3.1.2 靶标序列的装载

3.2 T1代低甲基化转基因植株的获得

3.2.1 浸花法获得拟南芥转基因植株

3.2.2 鉴定 T1 代阳性转基因植株

3.2.3 分析转基因植株CACTA1 位点甲基化水平

3.2.4 分析转基因植株FWA位点甲基化水平

3.3 转基因拟南芥靶位点DNA甲基化的改变可遗传给后代

3.3.1 T2转基因植株CACTA1 基因表达量的测定及甲基化水平的分析

3.3.2 T3转基因植株CACTA1 基因表达量的测定及甲基化水平的分析

第4 章 讨论与展望

4.1 CRISPR系统介导的植物基因组DNA 靶向去甲基化

4.2 DNA去甲基化靶向编辑系统进一步优化

4.3 DNA去甲基化靶向编辑技术未来展望

致谢

参考文献

附 录