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致谢
缩略词表
第一章 绪论
1.1 多不饱和脂肪酸简介
1.2 PUFAs对糖代谢的调控
1.2.1 促进葡萄糖转运蛋白（GLUT1和GLUT4）表达
1.2.2 提高胰岛素敏感性及改善胰岛素抵抗
1.2.3 调节胰高血糖素样肽1的分泌
1.3 PUFAs对脂代谢的影响
1.3.1 调节脂肪因子的产生
1.3.2 调节脂合成酶的活性
1.3.3 影响脂肪细胞增殖和分化
1.3.4 促进白色脂肪米色化
1.4 糖尿病与胰岛素抵抗
1.4.1 糖尿病及发病率
1.4.2 胰岛素抵抗
1.5 葡萄糖转运蛋白与胰岛素信号通路
1.5.1 葡萄糖转运蛋白
1.5.2 GLUT4囊泡转运模型
1.5.3 胰岛素信号通路
1.6 研究背景和主要内容
1.6.1 研究背景及目的
1.6.2 研究主要内容
第二章 PUFAs对脂肪细胞生物学功能的影响
2.1 引言
2.2 材料、试剂与仪器
2.2.1 材料
2.2.2 试剂及配制
2.2.3 仪器与设备
2.3 方法
2.3.1 细胞复苏、传代培养及冻存
2.3.2 细胞诱导分化和胰岛素抵抗模型构建
2.3.3 细胞存活率测定
2.3.4 葡萄糖消耗量测定
2.3.5 葡萄糖摄取率测定
2.3.6 统计分析方法
2.4 结果与分析
2.4.1 细胞诱导分化成熟鉴定
2.4.2 胰岛素抵抗模型鉴定
2.4.3 PUFAs对脂肪细胞存活率的影响
2.4.4 PUFAs对细胞基础状态下葡萄糖消耗的影响
2.4.5 PUFAs对胰岛素刺激状态下葡萄糖摄取的影响
2.5 本章小结
第三章 PUFAs对葡萄糖转运蛋白及胰岛素信号通路的调控作用
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 材料
3.2.2 试剂及配制
3.2.3 仪器和设备
3.3 方法
3.3.1 GLUT1-siRNA的选择、设计及合成
3.3.2 细胞转染siRNA靶向沉默GLUT1基因
3.3.3变性western blot检测相关蛋白表达水平
3.3.4 靶向沉默GLUT1基因后细胞葡萄糖消耗量测定
3.3.5 统计分析方法
3.4 结果与分析
3.4.1 靶向沉默GLUT1效果检测
3.4.2 PUFAs对沉默GLUT1细胞葡萄糖消耗量的影响
3.4.3 PUFAs对胰岛素信号通路AKT磷酸化水平的影响
3.4.4 PUFAs对GLUT4和IRAP蛋白表达水平的影响
3.5 本章小结
第四章 PUFAs对脂肪细胞GLUT4囊泡运输的动态调控作用
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 材料
4.2.2 试剂及配制
4.2.3 仪器和设备
4.3 方法
4.3.1 感受态菌转化、扩增与质粒抽提
4.3.2 细胞转染荧光蛋白
4.3.3 全内反射显微技术追踪活细胞GLUT4囊泡的动态转运
4.3.4 间接免疫荧光染色检测GLUT4囊泡融合情况
4.3.5 统计分析方法
4.4 结果与分析
4.4.1 PUFAs对GLUT4囊泡转移动力学过程的影响
4.4.2 PUFAs对GLUT4囊泡锚定的影响
4.4.3 PUFAs对GLUT4囊泡融合的影响
4.5 本章小结
第五章 基于SNARE学说的PUFAs调控囊泡运输的分子机制
5.1 引言
5.2 材料与仪器
5.2.1 材料
5.2.2 试剂及配制
5.2.3 仪器和设备
5.3 方法
5.3.1 细胞总RNA提取
5.3.2 逆转录-聚合酶链反应
5.3.3 蛋白表达水平测定
5.3.4 统计分析方法
5.4 结果与分析
5.4.1 PUFAs对Rab基因mRNA表达的影响
5.4.2 PUFAs对SNARE学说相关基因mRNA表达的影响
5.4.3 PUFAs对囊泡v-SNARE标志性蛋白VAMP2表达水平的影响
5.4.4 PUFAs对SNARE复合物表达水平的影响
5.5 本章小结
第六章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
参考文献
个人简历
浙江大学;
