多发性脂囊瘤的KRT17基因突变研究

摘要

研究背景：多发性脂囊瘤(steatocystoma multiplex，SM，OMIM:184500)是一种少见的皮肤附属器良性肿瘤，临床特征为多发性半球形肤色或淡黄色皮肤囊性损害，好发于躯干部和四肢近心端，常在青春期或成人早期发病，皮疹数目和大小可随年龄增长而不同程度增加。本病多呈常染色体显性遗传，尽管也有诸多散发病例的报道。目前认为该病主要是由KRT17基因的突变所致，同时KRT17基因也是先天性厚甲症2型(Pachyonychia congenital-2，PC-2)的一个致病基因。角蛋白K17常表达于甲床、毛囊外根鞘、皮脂腺和其它附属器，角蛋白有一个由310个氨基酸残基构成的α-螺旋杆状结构域，该结构域由1A、1B、2A和2B四个片段组成。位于1A螺旋起始和2B螺旋末端的序列是高度保守区，对体内10nm中间丝的装配至关重要。KRT17基因定位于17q12-q21，全长5kb，由8个编码蛋白的外显子组成。迄今为止，国内外学者在不同SM家系中共检测到3种不同的突变，目前尚未发现基因型与表型之间的明确相关性。本研究收集了中国汉族人两个多发性脂囊瘤家系，并通过直接测序的方法对这两个家系的成员进行KRT17基因的突变检测。 目的：检测中国汉族人两个多发性脂囊瘤家系的KRT17基因的致病性突变。 方法：调查两个中国汉族人多发性脂囊瘤家系情况，收集整理家系资料并采集家系成员血样。提取家系成员和100名正常对照的外周血白细胞基因组DNA，设计覆盖KRT17基因所有外显子编码区的7对引物，采用PCR反应扩增所有外显子编码区及其侧翼序列，通过对PCR扩增产物直接测序进行序列分析。 结果：通过对中国汉族人多发性脂囊瘤两家系进行突变检测，检测到一个国外曾经报道过的突变c.28lG>A(p.R94H)和一个国内外在多发性脂囊瘤家系中未见报道的突变c.275 A>G(p.N92S)。而这两个家系中表型正常个体及100个无关正常对照均不存在这样的突变。 结论：本研究证实错义突变c.281G>A(p.R94H)和c.275 A>G(p.N92S)是引起中国汉族人多发性脂囊瘤两家系临床症状的致病性突变，而不是正常多态性，为将来该家系的遗传咨询、产前诊断及基因治疗打下了基础。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

1.前言

2.实验材料与方法

2.1研究对象

2.2实验试剂

2.2.1病理检查所需试剂

2.2.2 DNA提取试剂

2.2.3 PCR反应、电泳试剂

2.2.4 PCR产物纯化和测序试剂

2.3实验仪器

2.3.1临床资料获取和组织病理检查器材

2.3.2 DNA提取器材

2.3.3 PCR反应、产物纯化和电泳的仪器

2.3.4 PCR产物测序仪器

2.4分析软件和电子数据库查询信息

2.5实验方法

2.5.1皮肤标本组织病理制备

2.5.2.全血标本采集

2.5.3基因组DNA提取

2.5.4 KRT17基因的引物设计

2.5.5 PCR反应

2.5.6 PCR产物琼脂糖凝胶电泳

2.5.7 PCR产物纯化

2.5.8对PCR片断进行测序

2.5.9测序结果分析

3.结果

3.1多发性脂囊瘤的临床与遗传特点分析

3.1.1家系1

3.1.2家系2

3.1.3家系遗传特点分析

3.2 DNA测序结果

3.3基因型与表型相关分析

4.讨论

5.结论

6.参考文献

附录

致谢

课题综述 多发性脂囊瘤的研究新进展