激光共聚焦显微镜观测慢性非细菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌细胞内钙离子浓度的变化

摘要

目的:探讨SD大鼠慢性非细菌性前列腺炎(Chronic abacterial prostatitis,CAP)炎症组与正常对照组前列腺平滑肌细胞内游离钙离子浓度(intracellular calcium[Ca2+]i)的差异及其在慢性非细菌性前列腺炎中的意义。
　　方法:将SD大鼠前列腺组织蛋白提取液与氟氏完全佐剂制备抗原液,于0天、第7天皮下多点注射实验组SD大鼠,且每只大鼠腹腔内注射百白破疫苗0.5ml,来诱导免疫性的慢性非细菌性前列腺炎症模型,造模8周后无菌状态下取大鼠前列腺组织,于无菌超净台上选取背侧叶组织,并剥除前列腺包膜、血管、脂肪等其他组织。每一只大鼠的前列腺组织分为大小两份,其中小份用于进行炎症的病理学鉴定;另一份组织采用贴块法体外培养PSMCs,并用差速贴壁法纯化传代,SP法免疫组织化学法鉴定细胞类型。于第二代将细胞传入激光共聚焦显微镜(LSCM)专用培养皿中,用FLUO-3AM荧光探针培养箱内孵育30分钟,LSCM激发波长为488nm连续动态扫描,观察细胞的荧光强度的变化。并用莱卡图像分析系统进行图像分析。
　　结果:镜下见培养的平滑肌细胞呈梭形或多边形,内有1-2个细胞核,核大居中,传代纯化后后呈束状排列,符合平滑肌细胞组织特征。并经SP法免疫细胞化学染色示α-SMA(+),证实为PSMCs。病理鉴定提示CAP组前列腺组织在光镜下发现出现典型的炎症反应表现,如:间质充血水肿,腺管管腔内和周围均见大量炎细胞浸润,对照组无明显炎症表现。在 CLSM扫描下,慢性前列腺炎组以及对照组前列腺平滑肌细胞内的钙离子荧光强度分别为80.39±9.00和27.95±10.04,差异具有显著性(p<0.01)。
　　结论:慢性非细菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌细胞内游离钙离子浓度明显升高,[Ca2+]i升高可能增强了前列腺平滑肌细胞的收缩作用,从而引起慢性前列腺炎的一系列如对疼痛敏感性增强、下腹部疼痛不适的症状。

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1 引言

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1主要仪器及试剂

2.2 实验方法

2.2.1非细菌性前列腺炎模型的建立

2.2.2 前列腺平滑肌的体外培养

2.2.3前列腺平滑肌细胞纯化、鉴定

2.2.4传代细胞的FLUO-3AM负载及[Ca2+]i实时检测与图像分析

2.3 统计学分析

3 结果

3.1 CAP组与正常组光镜下前列腺组织病理学表现

3.2 PSMCs的纯化及免疫细胞化学法鉴定

3.3炎症组与对照组前列腺平滑肌细胞内钙离子荧光强度的差异

4讨论

4.1 钙离子通道概述

4.2 钙离子与慢性前列腺炎

参考文献

附录

致谢

综述