声明
符号说明
第一章 绪论
1.1前言
1.2蛋白质内含子的发现、结构特征及类型
1.2.1标准蛋白质内含子
1.2.2微小蛋白质内含子
1.2.3断裂蛋白质内含子
1.3新型断裂蛋白质内含子
1.4蛋白质内含子催化蛋白质剪接的机理
1.4.1蛋白质的顺式剪接
1.4.2蛋白质的反式剪接
1.5蛋白质内含子的N端断裂与C端断裂
1.6蛋白质内含子的应用
1.6.1蛋白质内含子介导的表达蛋白质连接
1.6.2蛋白质内含子介导的毒素蛋白的生产
1.6.3蛋白质内含子对目的蛋白的可控剪接
1.6.4蛋白质内含子在蛋白质纯化中的应用
1.6.5蛋白质内含子介导的蛋白质特异位点修饰
1.6.6蛋白质内含子在多肽及蛋白质环化中的应用
1.7本课题研究内容与意义
1.7.1研究内容
1.7.2研究意义
第二章 实验材料和方法
2.1实验材料和仪器
2.1.1菌株、质粒和基因
2.1.2主要试剂
2.1.3 常用仪器和设备
2.1.4本实验室常用试剂配制
2.2实验相关技术
2.2.1 PCR反应
2.2.2 PCR产物的纯化
2.2.3 DNA胶回收
2.2.4质粒抽提
2.2.5感受态细胞的制备
2.2.6化学转化
2.2.7 DNA酶切与连接
2.2.8 菌液PCR鉴定
2.2.9 蛋白凝胶电泳
2.2.10 Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳
2.2.11 Western blot
2.2.12镍柱重生
第三章 实验过程
3.1克隆构建
3.1.1两种通用载体的构建
3.1.2重组表达质粒的构建
3.2重组蛋白的表达与剪接
3.2.1重组蛋白表达条件
3.2.2重组蛋白的可溶性分析与剪接
3.2.3重组蛋白的筛选
3.3目标蛋白的纯化
3.3.1可溶蛋白的非变性纯化
3.3.2包涵体蛋白的变性纯化
3.4目标蛋白的体外剪接
3.5环肽的鉴定
3.5.1改造目标蛋白
3.5.2对改造后的目标蛋白表达
3.5.3Western blot鉴定环肽
第四章 实验结果与分析
4.1通用载体及重组表达质粒的构建
4.1.1PCR产物扩增
4.1.2通用载体的克隆鉴定
4.1.3重组表达质粒的克隆鉴定
4.2重组蛋白的表达与剪接
4.2.1重组蛋白的表达与剪接分析
4.2.2鉴定目标蛋白
4.3目标蛋白的纯化与体外剪接
4.4环肽的鉴定
4.4.1改造后目标蛋白的克隆鉴定
4.4.2改造后目标蛋白的表达
4.4.3鉴定环肽
第五章 总结与展望
5.1结论
5.2实验创新点与难点
5.3展望
参考文献
硕士期间发表论文和在校期间参与科研项目
致谢
东华大学;
