白介素6(IL-6)和T细胞激活分泌调节因子(RANTES)在腹主动脉瘤壁和血清中的表达及意义

摘要

目的：　　本课题深入研究腹主动脉瘤发生发展过程中白介素 6（IL-6）与 T细胞激活分泌调节因子（RANTES）的炎症反应机制，对进一步明确腹主动脉瘤的发病机理进行针对性干预以及临床应用具有重要的意义。　　方法：　　本课题主要进行两方面的问题探究：一是白介素 6（IL-6）和 T细胞激活分泌调节因子（RANTES）与腹主动脉瘤的相关性分析；二是探讨白介素 6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）影响腹主动脉瘤形成的机制。　　分组：　　1.回顾性分析 40 例腹主动脉瘤患者的临床资料，加入正常对照组 40例，根据最大直径将患者分为 3 组：正常对照组，小腹主动脉瘤患者组（3cm＜腹主动脉最大瘤径＜5cm）、大腹主动脉瘤患者组（腹主动脉最大瘤径≥5cm），并收集其血液样本。　　2.收集正常腹主动脉壁组织标本及腹主动脉瘤壁组织标本各3例。　　3.培养腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞 RAW264.7，分为 3 组：A 组：RAW264.7 组，只加完全培养基；B组：RAW264.7+IL-6组：加入含有10ng/ml IL-6的完全培养基；C组：RAW264.7+IL-6+RANTES siRNA组：转染RANTES siRNA，用含有10ng/ml IL-6的完全培养基培养。　　实验主要分为以下几部分：　　(1)RT-PCR法检测转染siRNA RANTE的转染效率；　　(2)CCK-8法检测白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞增殖的影响；　　(3)Transwell法检测白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞迁移的影响；　　(4)ELISA法检测腹主动脉瘤患者血清白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）的水平；　　(5)RT-PCR检测腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞经IL-6以及siRNA RANTES处理后RANTES mRNA水平的表达；　　(6)白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）对STAT3及其磷酸化水平的影响；　　(7)免疫组化法检测白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）在腹主动脉瘤壁的表达情况。　　结果：　　(1)siRNA RANTE3的转染效率最高，可有效抑制RANTES的表达；　　(2)白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）促进腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的增殖；　　(3)白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）促进腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的迁移；　　(4)腹主动脉瘤患者血清白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）的水平升高；　　(5)腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞经IL-6处理后RANTES mRNA水平的表达升高，siRNA RANTES处理后RANTES mRNA水平的表达降低；　　(6)白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因（RANTES）可激活STAT3的磷酸化表达；　　(7)白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）在腹主动脉瘤壁的表达明显高于正常腹主动脉壁。　　结论：　　本研究证实了IL-6和RANTES是腹主动脉瘤的可靠生物学标志物。其作用机制可能与激活p-STAT3诱导的巨噬细胞浸润，MMP表达活性增加以及氧化应激激活相关。旨在为腹主动脉瘤的防治提供新的理论平台和技术手段。

目录

引言

1研究对象

2 实验方法

2.1 实验材料

2.2 主要实验仪器及耗材

2.3 细胞增殖检测

2.3.1 溶液配制

2.3.2 实验方法

2.4Transwell (小室）实验

2.4.1 溶液配制

2.4.2 实验方法

2.5 免疫组化实验

2.5.1 一抗信息

2.5.2 溶液配制

2.5.3实验方法

2.6细胞转染实验

2.6.1溶液配制

2.6.2方法

2.6.3统计学处理

2.7蛋白表达检测（Western Blot）

2.7.1抗体

2.7.2实验方法

2.8荧光定量检测腹主动脉瘤组织的表达

2.8.1溶液配制

2.8.2实验方法

2.9统计学分析

3实验结果

3.1 siRNA RANTES降低RANTES的mRNA表达，RANTES siRNA3的抑制程度最高

3.2 IL-6和RANTES促进腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的增殖

3.3 IL-6和RANTES促进腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的迁移

3.4 腹主动脉瘤患者血清IL-6和RANTES水平均高于健康者

3.5腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞经IL-6处理后RANTES mRNA水平上调，siRNA抑制RANTES的表达。

3.6 IL-6和RANTES可激活STAT3的磷酸化表达

3.7 IL-6和RANTES在腹主动脉瘤壁的表达增高

讨论

结论

参考文献

综述:白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）在腹主动脉瘤壁和血清中的表达及意义

参考文献

攻读学位期间的研究成果

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