HIF2α和PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌A549细胞生物学行为的影响

摘要

背景：非小细胞肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在我国人口恶性肿瘤死亡原因中排名第一，严重威胁人类的生存和健康。HIF2α(Hypoxia inducing factor2 alpha, HIF2α)是细胞应对缺氧时的关键转录因子，在生物体的生理以及病理过程中有着重要的作用。有研究表明PI3K/AKT信号通路参与细胞增殖、凋亡、分化，还可以影响非小细胞肺癌的发展。低氧是肿瘤微环境标志性特征，但是HIF2α和PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌发生发展的过程中是否发挥作用以及发挥什么样的作用，目前尚未清楚。　　目的：⑴探讨HIF2α对非小细胞肺癌A549细胞的影响。⑵阐明PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌A549细胞的影响。3.探寻HIF2α与PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌A549细胞中的关系，从而为临床提高非小细胞肺癌患者的生存率提供新思路。　　方法：①LY294002(PI3K/AKT信号通路阻断剂)10μM处理前后的非小细胞肺癌A549细胞在常氧条件培养一定的时间。Western blot检测 PI3K/AKT信号通路相关蛋白 PI3K-P110β和GSK3β的表达情况。Cell Counting Kit-8(CCK-8)增殖实验检测PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌细胞 A549生长情况的影响。Transwell小室基质侵袭实验检测PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌细胞A549侵袭能力的影响。划痕损伤实验观察PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌细胞 A549迁移能力的影响。统计软件采用SPSS22.0，P＜0.05认为差异有统计学意义。②LY294002(PI3K/AKT信号通路阻断剂)10μM处理前后的非小细胞肺癌A549细胞、A549-Ri hHIF2α细胞、A549-Control细胞在常氧条件培养一定的时间。采用 Western blot检测 PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K-P110β和GSK3β以及HIF2α的表达。Cell Counting Kit-8(CCK-8)增殖实验检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白以及HIF2α对非小细胞肺癌A549细胞、A549-Ri hHIF2α细胞、A549-Control细胞生长情况的影响。Transwell小室基质侵袭实验检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白以及HIF2α对非小细胞肺癌A549细胞、A549-Ri hHIF2α细胞、A549-Control细胞侵袭能力的影响。划痕损伤实验观察PI3K/AKT信号通路相关蛋白和HIF2α对非小细胞肺癌A549细胞、A549-Ri hHIF2α细胞、A549-Control细胞迁移能力的影响。统计软件采用 SPSS22.0，P＜0.05认为差异有统计学意义。　　结果：⑴PI3K/AKT信号通路阻断剂LY294002阻断非小细胞肺癌A549细胞Western blot检测显示：GSK3β的表达逐渐降低，于48h时最明显(P＜0.05有统计学差异)。PI3K-P110β的表达变化无统计学差异(P＞0.05)。 PI3K/AKT信号通路抑制前后，CCK-8增殖实验检测两组细胞的增殖速度为对照组＞实验组，差异有统计学意义(P＜0.05)。Transwell小室基质侵袭实验对照组、实验组两组细胞穿膜数分别为(353.25±11.9268)、(75.00±4.3970)个，差异有统计学意义(P＜0.05)。划痕损伤实验结果对照组、实验组两组细胞24h的迁移宽度分别为(130.823±2.6508)、(95.898±8.1910)；48h四组的迁移宽度分别是(222.295±3.6343)、(122.688±4.8677)，有统计学意义(P＜0.05)。⑵PI3K/AKT信号通路阻断剂 LY294002阻断非小细胞肺癌 A549细胞、A549-Ri hHIF2α细胞、A549-Control细胞前后Western blot检测显示：GSK3β的表达降低(与对应的对照组比较， P＜0.05，差异有统计学差异)。PI3K-P110β以及 HIF2α的表达变化无统计学差异(与对应的对照组比较，P＞0.05，差异无统计学意义)。PI3K/AKT信号通路抑制前后，CCK-8增殖实验检测六组细胞的增殖速度为 A549组＞A549+LY组、A549-Ri hHIF2α组＞A549-Ri hHIF2α+LY组、A549-Control组＞A549-Control+LY组(P＜0.05)。Transwell小室基质侵袭实验A549组、A549-Ri hHIF2α组、A549-Control组、A549+LY组、A549-Ri hHIF2α+LY组、A549-Control+LY组六组36h穿膜细胞数分别为(353.25±11.9269)、(289.25±11.7296)、(291.00±11.5181)、(75.00±4.3970)、(63.50±10.0830)、(73.75±6.5000)个，组间两两比较 A549+LY组与 A549-Ri hHIF2α+LY组、A549+LY组与A549-Control+LY组、A549-Ri hHIF2α组与A549-Control对照组、A549-Ri hHIF2α+LY组与A549-Control+LY组(P＞0.05，差异没有统计学意义)，其余各组间(P＜0.05，差异有统计学意义)。划痕损伤实验 A549组、A549-Ri hHIF2α组、A549-Control组、A549+LY组、A549-Ri hHIF2α+LY组、A549-Control+LY组六组24h的迁移宽度分别为(130.8218±2.6531)、(112.3070±4.6363)、(116.4783±2.6674)、(95.8990±8.1905)、(80.3390±2.7758)、(71.5215±4.2730)，(P＞0.05，没有统计学意义)，其余各组间(P＜0.05,有统计学意义)。　　结论：PI3K/AKT信号通路可促进人非小细胞肺癌A549增殖，提高肿瘤细胞的迁移侵袭转移能力。HIF2α使人非小细胞肺癌A549细胞的迁移侵袭能力增强。HIF2α以及PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌A549细胞的增殖、侵袭转移过程中可能各自发挥作用。

目录

声明

前言

第一部分 PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌A549细胞的影响

一、实验材料

二、 实验方法

三、实验结果

四、讨论

五、结论

第二部分 HIF2α以及PI3K/AKT信号通路对人非小细胞肺癌A549细胞的影响

二、实验方法

三、实验结果

四.讨论

五.结论

参考文献

文献综述:PI3K/AKT信号通路在恶性肿瘤中的研究进展

缩略语表

攻读学位期间发表文章情况

个人简历

致谢