淡豆豉提取物对去卵巢致骨质疏松大鼠的保护作用

摘要

目的：淡豆豉是大豆成熟种子经发酵制成的药食兼用的传统药物，多年来临床仅用其解表除烦的功效，现代研究发现淡豆豉含有生物活性物质大豆异黄酮，其具有植物雌激素样作用。前期研究显示淡豆豉对维甲酸所致骨质疏松大鼠有一定的治疗作用，为扩大淡豆豉的临床应用及研发抗骨质疏松新药，本研究采用去卵巢致骨质疏松模型，模拟绝经后骨质疏松症，观察淡豆豉抗骨质疏松的作用，并探讨其可能的作用机理。 方法：将72只6月龄健康SD雌性大鼠，分为假手术组、去卵巢模型组、淡豆豉低剂量组(5g生药/kg)、淡豆豉中剂量组(10g生药/kg)、淡豆豉高剂量组(20g生药/kg)、阳性药仙灵骨葆胶囊组(0.5g/kg)，每组12只。采用去卵巢的方法建立骨质疏松模型，术后1周开始灌胃给药，给药容量为10ml/kg，连续12周。大鼠笼养，自由摄食、饮水。各组动物于处死前18d和前3d分别腹腔注射盐酸四环素(30mg/kg)对骨进行荧光标记。每周称一次体重，记录体重变化。末次给药后，各组大鼠10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，分离血清，测定骨钙素(BGP)、降钙素(CT)；迅速摘取子宫，称重，计算子宫指数；完整取出左侧股骨，自然风干，采用小动物骨密度测定软件在骨密度仪上测试骨密度；完整取出腰椎(L3)及右侧股骨(去除股骨头)，置万能材料试验机上，取加载速度为1.0mm/min，进行椎体压缩试验，取跨距17mm，加载速度2.0mm/min，进行股骨三点弯曲试验；剥离胫骨，取胫骨近端1/3部分用70％乙醇固定，用乙醇逐级脱水，二甲苯透明，制作不脱钙骨切片和甲苯胺蓝染色切片，进行骨组织形态参数计量。右侧股骨头用TUNEL法检测骨细胞凋亡，计算骨细胞凋亡指数。实验数据以X±S表示，用SPSS12.0软件进行分析。 结果： 1.对体重的影响治疗前，各组大鼠体重均无差异(P＞0.05)；治疗12周后，各组大鼠体重增加，去卵巢模型组大鼠体重较假手术组明显增加(P＜0.01)；淡豆豉低、中、高各剂量组大鼠体重较去卵巢模型组明显降低(P＜0.01)。 2.对子宫指数的影响去卵巢模型组大鼠子宫指数较假手术组明显减小(P＜0.01)；淡豆豉各剂量组大鼠子宫指数较去卵巢模型组无显著性差异(P＞0.05)。 3.对血清CT、BGP的影响去卵巢模型组大鼠CT较假手术组明显降低(P＜0.01)，淡豆豉高剂量组大鼠CT较去卵巢模型组明显升高(P＜0.05)；去卵巢模型组大鼠BGP较假手术组明显升高(P＜0.01)，淡豆豉各剂量组大鼠BGP较去卵巢模型组有降低趋势，但无显著性差异(P＞0.05)。 4 对股骨骨密度的影响去卵巢模型组大鼠骨密度较假手术组明显降低(P＜0.05)；淡豆豉低、中、高各剂量组大鼠骨密度较去卵巢模型组均有升高趋势，但无显著性差异(P＞0.05)。 5 对骨生物力学参数的影响 5.1对腰椎(L3)结构力学参数的影响去卵巢模型组大鼠破断载荷、最大载荷较假手术组明显降低(P＜0.01)；淡豆豉高剂量组大鼠破断载荷、最大载荷较去卵巢模型组明显升高(P＜0.05或P＜0.01)。 5.2对腰椎(L3)材料力学参数的影响去卵巢模型组大鼠极限强度、弹性模量、最大应变较假手术组明显降低(P＜0.01)；与去卵巢模型组比较，淡豆豉中剂量组、高剂量组大鼠极限强度、最大应变明显提高(P＜0.01)，淡豆豉高剂量组大鼠弹性模量明显提高(P＜0.05)。 5.3对股骨生物力学参数的影响去卵巢模型组大鼠最大载荷、弹性模量及最大挠度较假手术组明显降低(P＜0.01或P＜0.05)；淡豆豉低、中、高各剂量组大鼠最大挠度较去卵巢模型组明显提高(P＜0.05)。 6 对胫骨骨形态计量参数的影响 6.1 对胫骨骨小梁形态的影响组织切片光镜可见，去卵巢模型组大鼠较假手术组大鼠骨小梁形态结构完整性差，数目减少，变细，连接减少，游离端增加；淡豆豉各剂量组大鼠较去卵巢模型组骨小梁数目增多，变粗，连接增多，游离端减少。 6.2对胫骨骨量参数TBV％的影响去卵巢模型组大鼠TBV％较假手术组明显降低(P＜0.01)；淡豆豉中、高剂量组大鼠TBV％较去卵巢模型组明显升高(P＜0.01)。 6.3 对胫骨吸收参数TRS％的影响去卵巢模型组大鼠TRS％较假手术组明显升高(P＜0.01)；淡豆豉高剂量组大鼠TRS％较去卵巢模型组明显降低(P＜0.01)。 6.4对胫骨形成参数TFS％、AFS％、MAR和BFR的影响去卵巢模型组大鼠TFS％、AFS％、MAR和BFR较假手术组大鼠明显升高(P＜0.01)；与去卵巢模型组比较，淡豆豉低、中、高各剂量组大鼠TFS％明显降低，淡豆豉中、高剂量组AFS％、BFR明显降低(P＜0.01或P＜0.05)，淡豆豉高剂量组MAR明显降低(P＜0.05)。 6.5对胫骨皮质骨OSW、mAR结果去卵巢模型组大鼠OSW、mAR较假手术组OSW、mAR明显升高(P＜0.01)，淡豆豉低、中、高各剂量组大鼠OSW较去卵巢模型组明显降低(P＜0.01或P＜0.05)；淡豆豉高剂量组大鼠mAR较去卵巢模型组明显降低(P＜0.05)。 7 对股骨头骨细胞凋亡的影响去卵巢模型组大鼠骨细胞凋亡指数较假手术明显升高(P＜0.01)：淡豆豉低、中、高各剂量组大鼠骨细胞凋亡指数较去卵巢模型组明显降低(P＜0.01或P＜0.05)。 结论：淡豆豉可减缓去卵巢大鼠体重过快增长的现象，促进骨小梁形成，改善骨结构，增加骨强度和骨硬度，提高骨质量，增强骨承受外力的能力，具有一定的抗骨质疏松作用。其机制可能为：一，淡豆豉升高血清CT水平，抑制破骨细胞活性，减少骨吸收，同时抑制成骨细胞活性，降低骨转换率，减缓骨转换周期；二，淡豆豉减缓骨质疏松大鼠骨细胞的凋亡。

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结论

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综述 中医药治疗骨质疏松研究进展

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