一种向植物布尼亚病毒提供帽子供体的实验体系的建立和应用

目录

声明

第一章 前言

1.1布尼亚病毒概述

1.2 番茄斑萎病毒研究概况

1.3 水稻条纹病毒研究概况

1.4 抓帽机制研究概况

1.4.1 帽子结构概述

1.4.2 抓帽机制

1.4.3 sNSV抓帽机制研究动态

1.2.4 抓帽的“帽子序列长度偏好性”

1.4.5 抓帽的“碱基配对”

1.4.6 抓帽过程中的引发与重配机制

1.5 本研究的思路与意义

第二章 向TSWV和RSV呈递人工帽子供体的研究

2.1 实验材料

2.1.1 植物材料与毒源

2.1.2 载体和菌株

2.1.3 引物

2.1.4 主要试剂和酶

2.2 实验方法

2.2.1 摩擦接种TSWV和RSV

2.2.2 pCHF3各衍生载体的构建

2.2.3转化农杆菌

2.2.4 农杆菌瞬时表达

2.2.5 总RNA提取

2.2.6 cDNA 第一条链合成

2.2.7 PCR反应

2.2.8 琼脂糖凝胶电泳与PCR产物回收

2.2.9 PCR产物连接克隆载体

2.2.10 转化大肠杆菌

2.2.11 阳性克隆筛选

2.3 结果与分析

2.3.1 TSWV和RSV可以在本氏烟上从农杆菌介导表达的外源mRNA中抓取帽子序列

2.3.2 TSWV和RSV都倾向于选择与其模板链3'末端互补的帽子序列

2.3.3 RSV对多碱基互补的帽子供体的倾向性比单碱基互补的帽子供体大

2.3.4 从相同的帽子供体中TSWV倾向于比RSV切割更长的帽子序列

2.3.5 抓取的帽子序列小于一定长度时TSWV和RSV都倾向于使用引发与重配机制

全文总结与讨论

参考文献

附录

致谢