P2X7R在初发系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞的表达及意义

摘要

目的:探讨嘌呤受体P2X配体门控性离子通道7(P2X7R)在初发系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞上的表达及其与部分炎症因子的相关性,从而揭示P2X7R在SLE发病机制中的作用及与临床特征的关系。　　方法:选择安徽省立医院风湿免疫科住院初发SLE患者29例,其中男性2例,女性27例;年龄18～57岁,平均33.83±10.77岁。均符合1997年美国风湿病学院(ACR)SLE分类标准。对照组28例健康志愿者,其中男性2例,女性26例;年龄18～59岁,平均年龄28.64±8.88岁,对照组与疾病组性别、年龄无统计学差异。均无自身免疫性疾病史。各组在性别和年龄构成上无显著统计学差异。排除标准:近2周内有细菌、病毒及结核等感染者。分别收集入选患者详细的临床资料并进行常规实验室及免疫学指标检查。SLE患者的SLEDAI评分为9～25分,平均为13.96±5.55分。根据SLE患者不同临床特征分为阳性组和阴性组;根据体温≥38.5摄氏度、≥2个外周关节肿痛、颊部红斑、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体阳性、雷诺现象、尿蛋白3+或24小时尿蛋白定量大于0.5g、神经精神狼疮的诊断标准,分别纳入发热组,关节炎组、皮疹组、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体阳性组、雷诺现象组、狼疮肾炎组,神经精神狼疮(NPSLE)组、无上述临床特征分别纳入阴性组。　　分离SLE患者和正常对照外周血单核细胞(PBMC),分别设立空白管、P2X7R-FITC、CD19-PE及CD4-AP;第五管为P2X7R-FITC、CD19-PE及CD4-APC混合三标,每管加相应抗体分别为9ul、2ul、2μl,混匀后4℃下避光孵育30min,待反应完后用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤,去除未结合的抗体,用流式细胞仪按常规操作进行检测。　　采集SLE患者和正常人的血清,存贮于-80℃冰箱。统一检测,采用ELISA法具体操作严格按照ELISA试剂操作说明进行。采用winmdi软件分析SLE患者淋巴细胞上P2X7R的表达水平与对照组的差异;比较SLE患者不同临床特征组P2X7R的表达水平差异;分析P2X7R与IL-6、TNF-α、IL-1β的相关性。　　结果:SLE患者外周血CD4+、CD19+细胞表面P2X7R的表达明显高于健康对照组,差异有统计学意义(CD4+细胞:2.21(3.55) vs 0.89(1.15),p=0.015;CD19+细胞:11.53(20.01) vs 6.66(6.27),p=0.037);SLE组血清中的细胞因子IL-6、TNF-α及IL-1β水平均明显高于对照组,差异有统计学意义;NPSLE组血清中IL-6的水平较非NPSLE组明显升高,差异有统计学意义;28例健康对照组外周血P2X7R的表达与血清中IL-6、TNF-α及IL-1β的水平呈正比;29例SLE患者外周血淋巴细胞中P2X7R表达与IL-6(r=0.449,p=0.015)呈正相关;初发SLE患者中,关节炎组淋巴细胞上P2X7R表达显著高于非关节炎组(3.84(11.53) vs 0.90(1.81),p=0.006);初发SLE患者中P2X7R在淋巴细胞及CD19+细胞中的表达均与SLEDAI评分呈正相关;淋巴细胞上的P2X7R表达与抗β2GPⅠ呈正相关(r=0.575,P=0.008)。血清中IL-6的水平与SLE患者中尿蛋白的水平呈正相关(r=0.523,p=0.004);血清中IL-6及IL-1β的水平与SLEDAI评分成正相关(分别为r=0.435,p=0.021;r=0.418,p=0.027)。　　结论:P2X7R可能通过介导炎症因子的释放参与SLE发病;可能与SLE患者的关节炎、狼疮肾炎及神经精神狼疮相关。

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1.前言

2．材料和方法

2.1 材料

2.2 方法

2.3 ELISA 检测上清IL-6/TNF-α/IL-1β水平：

2.4 其他免疫学指标

2.5 统计学处理

2.6 质量控制

3. 结果

3.1 P2X7R在各群淋巴细胞表面的表达

3.2 SLE不同临床特征组细胞因子水平的比较

3.3 P2X7R表达与血清中IL-6、TNF-α及IL-1β水平的相关性

3.4 P2X7R表达变化与临床指标及实验室指标的关系

3.5 细胞因子水平与临床指标及实验室指标的相关性

4. 讨论

5. 结论

6. 展望

参考文献

附 录

致谢

综 述

参考文献