慢性粒细胞白血病细胞遗传学研究及STI571联合化疗药物对K562细胞作用的研究

摘要

慢性粒细胞白血病是一种起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病。慢性粒细胞白血病的细胞遗传学特征是有Ph染色体，即t(9；22)(q34；q11)。9号染色体上的abl基因易位到22号染色体的bcr上，形成bcr/abl融合基因。bcr/abl融合基因是慢性粒细胞白血病的分子生物学标志。随着临床应用范围的扩大和时间推移，其耐药现象也逐渐显现。继续寻找新的，有效的方案以提高STI571的疗效，克服耐药现象以至根除白血病克隆，是目前研究慢性粒细胞白血病治疗的一个热点。本研究旨在研究伴复杂变异染色体易位、17号等臂染色体异常和8号三体染色体异常的慢性粒细胞白血病；研究STI571与高三尖杉脂碱或阿糖胞苷联合应用对K562细胞凋亡的影响和对bcr/abl融合基因的作用。本研究两部分： 第一部分：慢性粒细胞白血病细胞遗传学研究；第二部分：STI571联合化疗药物对K562细胞作用的研究。第一部分：慢性粒细胞白血病细胞遗传学研究一.25例伴复杂变异易位的慢性粒细胞白病细胞遗传学分析目的报道25例伴复杂变异易位的慢性粒细胞白血病染色体检查结果并进行细胞遗传学分析。方法25例染色体制备采用骨髓细胞直接法和/或短期培养法，应用R显带技术对其进行显带分析，bcr/abl融合基因检测采用RT-PCR法。结果经染色体检测的1209例的慢粒中25例伴复杂变异易位。伴复杂变异易位者占经染色体检测慢粒的2.07％。25例伴复杂变异易位的慢粒中，慢性期22例，急变期3例。仅累及3条染色体的复杂变异易位17例；除累及3条染色体的复杂变异易位外，还伴有其他染色体异常的7例。25例中，24例复杂变异易位同时累及9和22号染色体。有一例仅累及22号染色体。其中6例曾检出bcr/abl融合基因，均为阳性，其中4例为b3a2型，2例为b2a2型。本组中除b3a2，b2a2型bcr/abl融合基因外，还有无其他类型有待于更进一步的分子生物学研究。 二、12例伴17号等臂染色体的慢性粒细胞白血病报告并文献复习目的报道12例伴17号等臂染色体的慢性粒细胞白血病。方法12例染色体制备采用骨髓细胞直接法和/或短期培养法，应用R显带技术对其进行显带分析。结果经染色体检测的1209例的慢粒中12例伴7号等臂染色体。伴7号等臂染色体的慢粒占经染色体检测慢粒的0.99％。12例伴7号等臂染色体的慢粒中，慢性期6例、加速期4例、急变期2例。分别占所检出伴i(17q)慢粒的6/12(50％)、4/12(33％)和2/12(16％)。除5例仅有i(17q)，t(9；22)(q34；q11)异常外，其余8例均伴有其他染色体异常，占所检出伴i(17q)慢粒的8/12(67％)。在这8例中，伴双ph染色体者2例，占所检出伴i(17q)慢粒的2/12(67％)，、伴+8者4例，占所检出伴i(17q)慢粒的4/12(33％)。结论经染色体检测的1209例的慢粒中12例伴7号等臂染色体。伴7号等臂染色体的慢粒占经染色体检测慢粒的0.99％。i(17q)的功能意义尚不明了，伴有i(17q)的慢粒容易由慢性期发展为急性期的原因也未明了。有待进一步的研究。 三、17例伴8号三体染色体异常的慢性粒细胞白血病报告并文献复习目的报告17例伴8号三体染色体异常的慢性粒细胞白血病。方法17例染色体制备采用骨髓细胞直接法和/或短期培养法，应用R显带技术对其进行显带分析。结果经染色体检测的1210例的慢粒中17例伴8号三体染色体异常。伴8号三体染色体异常的慢粒占经染色体检测慢粒的1.40％。17例伴8号三体染色体异常的慢粒中，慢性期8例、加速期6例、急变期3例。分别占所检出伴+8异常慢粒的47％(8/17)、35％(6/17)和18％(3/17)。除3例仅有+8，t(9；22)(q34；q11)异常外，其余14例均伴有其他染色体异常，占所检出伴+8慢粒的82.3％(14/17)。在这14例中，伴双ph染色体者2例，占所检出伴+8慢粒的11.8％(2/17)，伴i(17q)者3例，占所检出伴+8慢粒的17.6％(3/17)伴+19者1例，占所检出伴+8慢粒的5.9％(1/17)。结论经染色体检测的1210例的慢粒中17例伴8号三体染色体异常。伴8号三体染色体异常的慢粒占经染色体检测慢粒的1.40％。16例伴8号三体染色体异常的慢粒中，慢性期8例、加速期5例、急变期3例。分别占所检出伴+8异常慢粒的47％(8/17)、35％(6/17)和18％(3/17)。除3例仅有+8，t(9；22)(q34；q11)异常外，其余14例均伴有其他染色体异常，占所检出伴+8慢粒的82.3％(14/17)。在这14例中，伴双ph染色体者2例，占所检出伴+8慢粒的11.8％(2/17)，伴i(17q)者3例，占所检出伴+8慢粒的17.6％(3/17)伴+19者1例，占所检出伴+8慢粒的5.9％(1/17)。 第二部分：STI571联合化疗药物对K562细胞作用的研究目的探索STI571与高三尖杉酯碱或阿糖胞苷联合应用有否协同抑制K562细胞增殖、影响K562细胞凋亡的作用；STI571与阿糖胞苷或高三尖杉碱酯联合应用是否对K562细胞的bcr/abl融合基因有协同作用。方法实验分为对照组，STI571作用组，高三尖杉酯碱作用组，阿糖胞苷作用组，STI571联合高三尖杉酯碱作用组和STI571联合阿糖胞苷作用组。采用细胞形态学观察和AnnexinV-PI联合双染检测各组药物对K562细胞凋亡的影响；采用实时定量PCR技术检测各组药物对K562细胞作用后bcr/ablmRNA水平的变化。结果STI571作用组，高山尖杉酯碱作用组，阿糖胞苷作用组，STI571联合高山尖杉酯碱作用组和STI571联合阿糖胞苷作用组的药物对K562细胞作用8小时后的细胞生长抑制率分别为11.00±5.19％，21.66±2.96％，15.00±4.35％，23.33±2.60％和17.33±6.06％。各药物作用组作用K562细胞8小时后都出现典型的细胞凋亡形态学改变。STI571，高三尖杉酯碱，阿糖胞苷，STI571联合高三尖杉酯碱和STI571联合阿糖胞苷对K562细胞作用8小时后早期细胞凋亡率分别为3.06％，5.44％，2.49％，13.44％和4.49％(对照：0.53％)。STI571，高三尖杉酯碱，阿糖胞苷，STI571联合高三尖杉酯碱和STI571联合阿糖胞苷对K562细胞作用8小时后晚期细胞凋亡率分别为1.15％，2.95％，2.69％，8.49％和2.45％(对照：1.13％)。STI571、高三尖杉酯碱，阿糖胞苷，STI571联合高三尖杉酯碱和STI571联合阿糖胞苷作用K562细胞8小时后，K562细胞的bcr/ablmRNA水平分别为46.96％，45.67％，44.52％，23.73％和36.20％(对照：68.54％) 结论STI571联合高山尖杉酯和STI571联合阿糖胞苷联合用药后与单药相比，细胞生长抑制率有一定的增加。STI571与高三尖杉酯碱联合对于诱导K562细胞凋亡具有较强的协同作用，STI571与阿糖胞苷联合对于诱导细胞凋亡的协同作用不明显。STI571与高三尖杉酯碱或阿糖胞苷联合应用对K562细胞的抑制增殖，诱导细胞凋亡作用中，主要是诱导K562细胞凋亡而不是抑制K562细胞增殖。STI571联合高三尖杉酯碱对于降低K562细胞的bcr/ablmRNA水平有较明显的协同作用，STI571联合阿糖胞苷对于降低K562细胞的bcr/ablmRNA水平有一定的协同作用。

目录

第一部分 慢性粒细胞白血病细胞遗传学研究

第二部分 STI571联合化疗药物对K562细胞作用的研究

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

文献综述

在学期间发表的论文和录用证明

致谢

附录