EBV相关胃癌及鼻咽癌中病毒潜伏期基因启动子甲基化状态的研究

摘要

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是重要的DNA肿瘤病毒，属人类疱疹病毒科γ疱疹病毒亚科成员，与人类多种恶性肿瘤密切相关。EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma，EBVaGC)及鼻咽癌组织中病毒基因表现为限制性表达，可能与病毒利用表观遗传机制，尤其是利用DNA甲基化来调控病毒基因启动子的活性。研究表明，EBV相关肿瘤组织中病毒可借甲基化沉默部分基因，导致相关蛋白表达水平的降低，因而对槽主免疫系统的刺激也减弱，病毒借此来逃避宿主免疫攻击，同时也提示针对病毒基因表观改变的靶向去甲基化作用有可能成为治疗EBV阳性肿瘤的新方法。
　　 目的：研究分析青岛地区EBVaGC及鼻咽癌组织中EBV主要潜伏期编码基因启动子甲基化状态。
　　 方法：选择32例EBVaGC及20例EBV阳性鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)作为研究对象，以EBV阳性细胞系Raji，B95-8和Akata作为对照，采用甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR，MSP)及亚硫酸氢盐-基因组测序法(Bisulfite genomic sequencing，BGS)检测分析其EBV核抗原编码基因启动子Cp，Wp和Qp以及EBV潜伏膜蛋白LMP1和LMP2A编码基因启动子的甲基化状态。
　　 结果：①EBV阳性细胞系中EBV编码基因启动子甲基化状态表现为：B95-8细胞系Cp未发生甲基化，Raji细胞系Cp呈高甲基化，但在Akata细胞系同时检测到甲基化和未甲基化的Cp。Raji和Akata细胞系Wp呈高甲基化，但在B95-8细胞系中则表现为部分未甲基。3种细胞系中均未检测到Qp、LMP1p和LMP2Ap的甲基化。②EBVaGC及鼻咽癌肿瘤标本中EBV核抗原编码基因启动子的甲基化状态与肿瘤细胞的潜伏感染类型基本一致：Cp和Wp呈高甲基化状态，而Qp未发生甲基化。③EBVaGC和EBV阳性鼻咽癌组织中LMP1和LMP2A编码基因启动子甲基化状态有差别，二者在EBVaGC组织中的甲基化程度明显高于EBV阳性鼻咽癌(LMP1：χ2=19.1462,P<0.0001；LMP2Ap；χ2=11.0139,P=O.0009)。
　　 结论：EBV相关胃癌和EBV阳性鼻咽癌组织中病毒潜伏期基因启动子的甲基化状态不同，甲基化是调控EBV潜伏期基因启动子活动的重要机制之一。