显性核不育亚麻可育、不育花蕾mRNA差异表达研究及差异片段分析

摘要

本文利用mRNA差异显示技术，以显性核不育亚麻兄妹交分离出的遗传背景极其相似的可育株和不育株为材料，对可育、不育花蕾中基因差异性表达进行研究，并对差异片段进行反向Northern杂交验证、克隆、测序以及序列分析。主要研究结果如下： (1)建立了适合核不育亚麻的DDRT-PCR体系。 (2)共获得差异片段52个。其中36个为不育差异片段，其余的16个为可育差异片段。 (3)对这52个差异片段进行反向Northern杂交验证，最终获得了5个不育花蕾阳性片段：G+E07+100bp、G+E07+330bp、G+E07+830bp、G+S273+500bp、A+S267+300bp；2个可育花蕾阳性片段：G+S274-250bp、G+S274-450bp。 (4)这些阳性片段经克隆、测序和BLAST序列分析，结果显示：G+E07+100bp与植物GTP结合蛋白高度同源，在细胞信号传导过程中有调节作用，推测可能与核不育亚麻育性有密切关系；G+E07+330bp为亚麻花蕾的一段cDNA，可能与核不育亚麻花粉发育有关；G+E07+830bp与β-木糖苷酶同源性很高，它可能影响了亚麻花药、花粉中碳水化合物的代谢，从而导致了花粉的败育；G+S273+500bp与NAD+ADP核糖转移酶有很高的同源性；A+S267+300bp与分泌蛋白高度同源，推测它可能参与了核不育亚麻信号传导途径、形态发生、细胞凋亡等过程，最终影响了雄性不育的发生；G+S274-250bp和G+S274-450bp与已知植物的碱基序列和氨基酸序列同源性很低，推测它们可能是与显性核不育亚麻育性有关的新基因。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

1引言

1.1植物雄性不育

1.1.1植物雄性不育的来源

1.1.2雄性不育类型

1.1.3植物雄性不育的细胞学研究

1.2 mRNA差异显示技术

1.2.1 mRNA差异显示的优点

1.2.2 mRNA差异显示技术在实际应用中存在的问题

1.2.3 mRNA差异显示技术的改进

1.2.4 mRNA差异显示技术在植物雄性不育研究中的应用

1.3麻雄性不育研究进展

1.3.1亚麻概述

1.3.2亚麻雄性不育的研究进展

1.4本研究的目的和意义

2材料及方法

2.1研究材料

2.1.1植物材料

2.1.2主要仪器设备

2.1.3主要试剂

2.1.4主要引物

2.1.5主要试剂的配制

2.2实验方法

2.2.1花蕾总RNA的提取

2.2.2总RNA质量的检测

2.2.3反转录—cDNA第一链的合成

2.2.4 cDNA第一链的PCR扩增

2.2.5 PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染

2.2.6差异片段的回收及二次扩增

2.2.7反向Northern杂交验证

2.2.8阳性cDNA差异片段的克隆及序列分析

3结果与分析

3.1总RNA质量的检测结果

3.2 mRNA差异条带的显示

3.3部分差异条带的显示结果

3.4差异片段回收后的二次PCR扩增

3.5反向Northern杂交验证

3.6阳性差异片段的克隆与检测

3.7阳性差异片段的测序结果

3.7.1不育花蕾特异片段序列

3.7.2可育花蕾特异片段序列

3.8序列同源性分析

3.8.1阳性差异片段G+E07+100bp的比对结果

3.8.2阳性差异片段G+E07+330bp的比对结果

3.8.3阳性差异片段G+E07+830bp的比对结果

3.8.4阳性差异片段G+S273+500bp的比对结果

3.8.5阳性差异片段A+S267+300bp的比对结果

3.8.6阳性差异片段G+S274-250bp和G+S274-450bp的比对结果

4讨论

4.1 RNA的提取

4.2 mRNA差异显示

4.3差异片段与亚麻雄性核不育的关系

4.3.1不育差异片段G+E07+100bp与育性的关系

4.3.2不育差异片段G+E07+330bp与育性的关系

4.3.3不育差异片段G+E07+830bp与育性的关系

4.3.4不育差异片段G+S273+500bp与育性的关系

4.3.5不育差异片段A+S267+300bp与育性的关系

4.3.6可育差异片段G+S274-250bp和G+S274-450bp与育性的关系

5结论

致谢

参考文献

附录

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