首页> 中文学位 >蓝莓花色苷对紫外引起HepG2细胞DNA损伤保护作用的研究
【6h】

蓝莓花色苷对紫外引起HepG2细胞DNA损伤保护作用的研究

代理获取

目录

声明

摘要

1 前言

1.1 研究背景

1.2 花色苷概述

1.2.1 花色苷的化学结构和种类

1.2.2 花色苷的稳定性

1.2.3 花色苷的生理功能

1.2.4 花色苷研究的发展趋势

1.3 蓝莓花色苷

1.3.1 蓝莓概述

1.3.2 蓝莓的保健功能

1.3.3 蓝莓花色苷概述

1.4 DNA损伤

1.5 紫外辐射对DNA结构影响的研究现状

1.6 天然抗氧化剂对DNA保护的现状

1.7 本课题研究目的及意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验材料

2.1.2 主要试剂

2.1.3 仪器与设备

2.1.4 主要试剂配制

2.2 试验方法

2.2.1 蓝莓花色苷的提取

2.2.2 花色苷的纯化

2.2.3 蓝莓花色苷分析鉴定

2.2.4 HepG2细胞的培养

2.2.5 MTT法检测紫外辐射对HepG2细胞存活率的影响

2.2.6 蓝莓花色苷对紫外造成HepG2细胞损伤的保护作用的研究

2.2.7 统计学方法

3 结果与讨论

3.1 蓝莓花色苷提取

3.1.1 蓝莓花色苷最大吸收波长的确定

3.2 AB-8大孔树脂对蓝莓花色苷的纯化

3.2.1 吸附时间的测定

3.2.2 解吸时间的测定

3.2.3 pH值对AB-8大孔树脂吸附的影响

3.2.4 乙醇浓度对AB-8树脂解吸的影响

3.2.5 大孔树脂纯化蓝莓花色苷的吸附流速的选择

3.2.6 大孔树脂纯化蓝莓花色苷的洗脱流速的选择

3.2.7 花色苷含量的测定

3.3 蓝莓花色苷分析鉴定

3.3.1 蓝莓花色苷红外光谱图分析

3.3.2 蓝莓花色苷质谱分析

3.4 MTT法检测紫外辐射对HepG2细胞存活率的影响

3.5 蓝莓花色苷对UV造成HepG2细胞损伤保护作用的研究

3.5.1 MTT法检测蓝莓花色苷对HepG2细胞的影响

3.5.2 MTT法检测细胞增殖活性

3.5.3 电镜观察细胞形态学改变

3.5.4 Hoechst33258染色观察细胞核形态学改变

3.5.5 彗星试验检测蓝莓花色苷对UV诱导的HepG2细胞DNA损伤的保护

3.5.6 蓝莓花色苷对UV辐照HepG2细胞活性氧自由基的清除作用

3.5.7 细胞周期分析DNA含量

3.5.8 蓝莓花色苷对紫外辐射HepG2细胞线粒体跨膜电位检测

3.5.9 免疫荧光检测γH2AX

3.5.10 蓝莓花色苷对UV损伤HepG2细胞的p53,p21,Gadd45,MDM2 mRNA表达的影响

3.5.11 蓝莓花色苷对UV损伤HepG2细胞的p53、p-p53、p21、Gadd45、MDM2蛋白表达的影响

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读硕士期间发表的论文

致谢

展开▼

摘要

DNA是储存和传递遗传信息的生物大分子,其分子的完整性对生物生命活动至关重要。随着现代社会工业化进程的加快,臭氧层的减少会直接削弱大气层截留太阳光中紫外线的能力,从而导致到达地面的紫外线明显增加。过量的紫外辐射可引起细胞内DNA碱基发生突变、DNA断裂、DNA-DNA交联、DNA-蛋白交联以及染色体畸变等损伤,DNA损伤若不能及时修复,细胞将发生癌变甚至死亡。紫外线辐射会导致DNA损伤,造成白内障、皮肤光老化、癌变、免疫抑制等一系列疾病的发生,寻找高效的抗氧化剂是预防和治疗紫外损伤的重要手段。
  本研究对蓝莓中的花色苷组分进行分离、纯化,其结构分析结果推测蓝莓在甲醇、乙醇、水三种溶剂提取后分别得到了以矢车菊素和锦葵色素;矢车菊素;矢车菊素和飞燕草素为主的花色苷成分。
  本试验以人肝癌HepG2细胞为实验材料,用MTT法检测细胞增殖活性建立了紫外辐射对人肝癌HepG2细胞的损伤模型。实验分为对照组、紫外照射组和花色苷保护组,经紫外线照射20s人肝癌HepG2细胞,保护组在紫外线照射人肝癌HepG2细胞前预处理蓝莓花色苷。用扫描电镜观察细胞形态、Hoechst33258染色观察细胞核形态、MTT法检测细胞增殖活性、单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤、流式细胞术检测细胞内活性氧自由基的清除、流式细胞术检测细胞周期、激光共聚焦显微镜分析线粒体跨膜电位的检测、免疫荧光法检测γH2AX,RT-PCR检测p53、p21、Gadd45、MDM2mRNA表达及Westernblotting检测p53、p-p53、p21、Gadd45、MDM2蛋白表达。
  结果表明,花色苷保护组可以降低紫外线造成HepG2细胞的死亡率;减少了细胞膜的囊泡,细胞形态变圆;减少细胞胞核染色质浓缩,增加正常细胞形态的细胞数目;缩短彗星迁移距离,减轻细胞DNA受损程度;降低细胞内ROS含量;减少细胞停滞在G1期的细胞数目;线粒体跨膜电位相对紫外照射组细胞升高;γH2AX焦点数目及荧光强度明显降低;p53、p21、Gadd45、MDM2mRNA表达降低;p53、p-p53、p21、Gadd45、MDM2蛋白表达水平显著降低。因此蓝莓花色苷对紫外线致HepG2细胞的损伤具有一定保护及修复作用。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号