规模化酵母双杂交技术平台的建立及人CtBP2与CCNH蛋白相互作用的研究

摘要

本文对规模化酵母双杂交技术平台的建立及人CtBP2与CCNH蛋白相互作用进行了探讨。本研究建立了一种规模化的酵母双杂交技术平台。该平台的特点是利用酵母接合的原理采用高通量自动化移液机器人系统进行规模化的酵母双杂交筛选研究。为此，在对该平台的无菌化操作、菌液点样条件、自动化程序设置、数据采集和处理等方面进行了探索和优化。在此基础上，利用这个平台对人类肝脏的1536个AD克隆与1248个BD克隆进行了规模化的酵母双杂交筛选，得到了184对相互作用，并对这些相互作用进行了初步的分析。

目录

声明

第一部分规模化酵母双杂交技术平台的建立与应用

一、前言

二、材料与方法

2.1材料

2.2方法

三、结果

3.1大规模酵母双杂交平台的构建

3.2筛选神经退行性病变相关基因相互作用蛋白

3.3利用大规模mating筛选CtBP2相互作用蛋白

四、讨论

4.1 规模化酵母双杂交平台构建立的意义

4.2两步法mating的选择

4.3平台的构建

4.4大规模酵母双杂交的可靠性

4.5神经退行性疾病网络的构建

参考文献

第二部分人CtBP2和CCNH蛋白相互作用的研究

一、前言

二、材料与方法

2.1材料

2.2方法

三、结果

3.1体外GSTpull down结合实验

3.2 CtBP2和CCNH体内免疫共沉淀实验

3.3 CtBP2和CCNH的细胞共定位研究

3.4 CtBP2与CCNH相互作用区域的确定

四、讨论

参考文献

论文总结

综述：细胞周期蛋白依赖性激酶CDK7的研究进展

1.CDK7双重功能的发现

2.CDK7与细胞周期调控

3.CDK7与转录

4 CDK7底物的识别

5.CDK7活性的调节

6.CDK7作为药物靶点

参考文献

附录

致谢