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根癌农杆菌介导芜菁花叶病毒的Hc-Pro基因对茎用芥菜的遗传转化研究

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前言

第一章文献综述

第一节十字花科作物转基因研究进展

1转化受体

2转化方法

3目的基因

4最佳转化系统及最高转化频率

5无选择标记基因转化

6转基因存在的问题

7前景

第二节转基因植物抗病毒机理

第二章以子叶为外植体进行HC-PRO基因的转化

1材料与方法:

1.1试验材料

1.2试验方法

2结果与分析

2.1不定芽的诱导

2.2除草剂对子叶分化及苗生长的影响

2.3农杆菌对子叶的影响

2.4抗生素对子叶分化的影响

2.5转化条件对转化效率的影响

2.6转化频率

3讨论

3.1除草剂(BASTA)对不定芽的影响

3.2抗生素对子叶的影响

3.3农杆菌浓度对转化效率的影响

3.4预培养及共培养对转化效率的影响

4小结

第三章以愈伤组织为外植体进行HC-PRO基因的转化

1材料与方法

1.1试验材料

1.2试验方法

2结果及分析

2.1子叶诱导愈伤组织生长曲线的获得

2.2除草剂对愈伤组织的影响

2.3抗生素对愈伤组织分化的影响

2.4程菌液的准备及转化

2.5转化条件对转化效率的影响

2.6转化效率

2.7转化植株的遗传多样性

3讨论

第四章转化植株的鉴定及其病毒抗性研究

1转化植株的分子生物学鉴定

1.1材料与方法

1.2结果与分析

2转化植株的田间接种鉴定及ELASA分析

2.1材料与方法

2.2结果及分析

3讨论

参考文献

附图1:基因转化流程

附图2:子叶再生及转化途径

附图3:愈伤组织再生途径

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摘要

本研究以茎瘤芥(BrassicajunceaCoss.var.tumidaTsenetLee)作为试验材料,分别以子叶和子叶诱导的愈伤组织为外植体,建立了农杆菌介导的芜菁花叶病毒Hc-Pro基因的转化体系,得到了茎瘤芥转基因植株。本研究不仅为利用现代病毒分子生物学和植物基因工程育种获得抗病毒农作物提供理论和技术依据,也为芥菜以及其他十字花科作物转基因技术提供技术平台。 主要结果归纳如下:以子叶为外植体的基因转化体系的建立。对农杆菌、抗生素对子叶分化的影响进行了研究。以愈伤组织为外植体的基因转化体系的建立,对抗生素对愈伤组织分化的影响以及转化植株的遗传多样性进行了研究。转化植株的分子及抗病性鉴定。经PCR及Southernblot检测,目的基因及筛选标记基因已经插入了茎瘤芥染色体基因组中。

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